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提取牛血清白蛋白及储存的精妙办法
更【gèng】新时间:2024-9-21   点击次数:1172次

提取办法:

1、盐析    

取小牛血清【qīng】0.5ml+PBS液0.5ml+饱和【hé】硫酸铵2.3ml,充分殽【yáo】杂【zá】匀【yún】称,静置20min,2500r/min 离心10min。


2、透析

取玻璃【lí】纸一张,折成袋【dài】形,将离心后的上清液【yè】倒入袋【dài】内,用线扎紧上口(过【guò】细要留有清闲),放入有【yǒu】自来水的小烧【shāo】杯中透析,要不断【duàn】震动【dòng】,每隔【gé】2min换【huàn】一次水,换【huàn】15次。放入试管待用。 


3、准备与电泳

(1)取【qǔ】两条【tiáo】2.5cm x 8.0cm 的膜条,将膜【mó】条无光辉面向下【xià】,放入作育皿中的巴比妥【tuǒ】缓冲液【yè】中冲【chōng】锋渗透。

(2)将充分【fèn】渗透【tòu】的两条膜【mó】条取出,用干净滤【lǜ】纸吸去多余的【de】缓【huǎn】冲【chōng】液,以醋纤【xiān】膜的光辉面距一端1.5cm处【chù】作为点样线,并【bìng】用铅笔在上面编好【hǎo】号①②。

(3)用【yòng】两个点样器分别在标【biāo】准液和【hé】测【cè】定液中櫵【jiáo】一下,点样器下端粘【zhān】上薄层标准液和样液,然后将点【diǎn】样【yàng】器竖直【zhí】,举行点样。

(4)电泳【yǒng】 将点【diǎn】样后的膜条置于电泳槽架【jià】上,组织时点样面向下(无光【guāng】辉面),点样端置【zhì】于阴极,膜【mó】条与滤纸【zhǐ】贴【tiē】紧【jǐn】,待平衡5min后,即可通电【diàn】。调治电【diàn】泳仪,使南【nán】北极间距的电压为【wéi】15v/cm,电流0.4~0.6Ma/cm膜条,通电【diàn】50分钟【zhōng】封闭电源。

(5)通【tōng】电结【jié】束后【hòu】,用镊子取出膜条,直接浸于盛有氨基【jī】10B的染色 液中【zhōng】,染2min取出,立刻浸于漂洗液中,分别在漂洗液【yè】中【zhōng】各漂洗5min,直【zhí】至布景漂净【jìng】为止。用干滤纸吸【xī】干薄膜。

(6)观察两张薄膜的色彩。

储存办法:
    
每10克加100毫升水进行溶解,或用 PBS溶解也可【kě】,视【shì】用【yòng】处而决议。然后分装成小支。若【ruò】不【bú】运用防腐【fǔ】剂【jì】可储存在零【líng】下20或30摄氏度的恒【héng】温柜中,若【ruò】运用【yòng】防腐剂则可储存【cún】在零上【shàng】4摄氏度【dù】的环境下。

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