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关于HPLC的常见问题及解答
更新【xīn】时间:2024-9-23   点【diǎn】击次数:1229次【cì】

一、问:液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?

答:

1.筛板堵塞或柱失【shī】效,解决办法是反【fǎn】向冲【chōng】洗【xǐ】柱子,替换筛板或【huò】更换柱子。
2.存在【zài】干扰峰,解决办法为使用【yòng】较【jiào】长的柱子,改换流动相或更【gèng】换【huàn】选择【zé】性好的柱子

二、问:用HPLC进行分析【xī】时【shí】保留时间有时发【fā】生漂移,有时【shí】发生快速【sù】变化,原因何在?如何【hé】解决?

答:关于漂移问题:
1.温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定
2.流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等
3.柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡
关于快速变化问题
1.流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定
2.泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。
3.流动【dòng】相不【bú】合适【shì】,解决办法为改换流动相或【huò】使流动相在控制室内进【jìn】行适当【dāng】混合

三、问:HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法

答:

1.样品量不足,解决办法为增加样品量 医.学教育网搜集整理
2.样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
3.样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器
4.检测器衰减太多。调整衰减即可。
5.检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数
6.检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。
7.检测池中有气泡。解决办法为排气。
8.记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。
9.流动相流量不合适。调整流速即可。
10.检【jiǎn】测器与记录【lù】仪超【chāo】出校正曲线。解决办法为检【jiǎn】查记录【lù】仪与检测器,重作校正曲【qǔ】线。

四、问:做HPLC分析时,柱压不稳定,原因何在?如何解决?

答:原因可能有:
1.泵内有空气【qì】,解决的办法是【shì】清【qīng】除【chú】泵内空气,对溶剂进行脱气处理;
2.比例阀失效,更换比例阀即可;
3.泵密封垫损坏,更换密封垫即可;
4.溶剂中的【de】气泡,解【jiě】决的办法是对溶剂【jì】脱气,必要时改【gǎi】变脱气【qì】方法;
5.系统检漏,找出漏点,密封即可;
6.梯度洗脱,这时压力波动是正常的。

五、问:我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高,请问为什么?

 

答:柱压【yā】过高是HPLC柱【zhù】用户zui常碰到的问题。其原因有【yǒu】多方面,而【ér】且常常并不是柱子本【běn】身的问题【tí】,您可按下面【miàn】步骤检查问题的【de】起【qǐ】因。 医【yī】学教|育【yù】网搜集整理
1.拆【chāi】去【qù】保【bǎo】护预柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的【de】问题【tí】,若柱压仍高,再检【jiǎn】查;
2.把色谱柱从仪【yí】器上取下,看压力是否【fǒu】下降,否则是管路【lù】堵塞,需清洗,若压力【lì】下【xià】降,再【zài】检【jiǎn】查;
3.将柱子的进出【chū】口反过来【lái】接在仪器上【shàng】,用10倍柱体积的流【liú】动相冲洗【xǐ】柱子【zǐ】,(此时不要连接检【jiǎn】测器,以防固体颗粒进【jìn】入【rù】流动池【chí】)。这时,如果柱压仍不下降,再检查【chá】;
4.更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明您的溶剂或样品含【hán】有颗粒杂质,正是这些【xiē】杂质将筛板堵塞【sāi】引起压力【lì】上升。若柱压还高,请与厂商。一般情况下【xià】,在进样器【qì】与【yǔ】保护柱【zhù】之间接一【yī】个【gè】在线【xiàn】过滤器便可避免柱压【yā】过高的问题,SGE提【tí】供的Rheodyne7315型过滤器就是【shì】解【jiě】决【jué】这一问题的*选择。 

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