一、实验原理

植物的性：植物体的【de】任何一个【gè】细胞都具有生【shēng】长分化【huà】成为一个完整【zhěng】植株的【de】能【néng】力，称为植物【wù】的性。

植物组织培养就是利用植物的性进行离体无菌植物培养的一门技术。

植物组织培【péi】养按其原始意【yì】义，就【jiù】是【shì】指愈伤组织培【péi】养。但发展【zhǎn】至今【jīn】，其范【fàn】围日益扩大，已包括植物和它的离体器官、组织【zhī】、细胞和【hé】原生质体的离体无菌培养。因此，拥有几种【zhǒng】不同水平【píng】的培养技术，即整体的、器官的、组织的【de】、细胞的【de】和【hé】原生【shēng】质的培养技术【shù】。

本【běn】实验选择豌豆为材【cái】料，豌豆（Pisumsativum）属豆科植【zhí】物，是粮食、饲料和重【chóng】要的蔬菜作【zuò】物，也是【shì】遗传学家和【hé】植物生理学家【jiā】感兴趣【qù】和乐于采用【yòng】的实验植【zhí】物，豌豆的根、茎、子叶、下胚轴、上【shàng】胚轴、花芽【yá】等【děng】外植【zhí】体【tǐ】，皆【jiē】可形【xíng】成愈伤组织，其中茎尖、幼胚、幼【yòu】叶等器官可成功的再植株。

茎尖【jiān】培养可包括小至十几微米的茎尖分生【shēng】组【zǔ】织（生【shēng】长点【diǎn】）和【hé】大至【zhì】几十毫米【mǐ】的茎尖【jiān】或更大的芽培养。在实践应【yīng】用上【shàng】，常采用生长点的【de】培养使患病植物【wù】去【qù】病毒【dú】，以达到挽救优良品种，提高产量和质量之目的。

二、实验目的

植物细胞和组织培养的技术性【xìng】强【qiáng】，要求无【wú】菌操作【zuò】，通过本实验可【kě】初步【bù】掌握常规【guī】的【de】组【zǔ】织培养技【jì】术，加深对无菌操作的了解。

三．实验材料

仪器设【shè】备：1．酒精灯【dēng】、三角烧【shāo】瓶，培养皿；2．镊子、剪【jiǎn】刀、剖针；3．双筒解剖显微【wēi】镜；4．光【guāng】照培【péi】养箱【xiāng】或温室；

材料烟草无菌苗、豌豆幼苗。

试剂

（1）MS培养基，植物激素：NAA、6-BA等；

（2）饱和漂液（次氯酸钠）；

（3）70%酒精、100%酒精、酒精棉球；

（4）无菌水

 四．实验步骤

豌豆苗的茎尖培养

① 取发芽6天的豌豆幼【yòu】苗10株，简取1厘米左右的茎尖，浸入70%的酒精中【zhōng】1分【fèn】钟，再浸【jìn】入饱和次【cì】氯酸【suān】钠溶液中消毒15分钟，（此步【bù】以后要【yào】求无菌）用无菌水中冲洗5次，在灭菌【jun1】的滤纸【zhǐ】上吸干水【shuǐ】分，放入【rù】灭【miè】菌的培养皿中。

② 在【zài】双目解【jiě】剖镜【jìng】下，用灭菌的解剖针剥去幼叶露出【chū】生长锥，用灭【miè】菌的【de】解剖针挑取带着两至三【sān】个【gè】叶原基的生长【zhǎng】锥。

③ 将挑好的茎尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-苄【biàn】基【jī】腺嘌呤（6-BA）的培养基上诱导【dǎo】愈伤【shāng】组织形成，用【yòng】封口膜将培养皿【mǐn】封好【hǎo】。

④ 在恒温培养箱中，26℃下,培【péi】养【yǎng】六【liù】周，形成愈伤组【zǔ】织，经【jīng】继代后，可【kě】用【yòng】于生根培养