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单克隆抗体的鉴定
更新时间【jiān】:2024-9-23   点【diǎn】击次数:1218次【cì】

对制备的McAb进行系【xì】统的鉴【jiàn】定是十分必【bì】要的,应做下述几【jǐ】个方面【miàn】的鉴【jiàn】定:

1.抗体特异性的鉴定

除用【yòng】免疫原(抗原)进行抗体【tǐ】的检测【cè】外,还【hái】应该用与其抗原成分【fèn】相关的其它抗原【yuán】进行【háng】交叉试验【yàn】,方法可用ELISA、IFA法。例如:

 制备抗【kàng】黑【hēi】色素瘤细胞的McAb,除【chú】用黑色【sè】素瘤细胞反【fǎn】应外【wài】,还【hái】应该用其它脏器【qì】的【de】肿瘤细胞和【hé】正常细胞进行交叉反应,以便挑选肿【zhǒng】瘤【liú】特异性或肿瘤相关抗原的【de】单克隆抗体。

 制备【bèi】抗重组【zǔ】的细【xì】胞因子的单克隆抗体,应首先考虑是否与表达【dá】菌【jun1】株的蛋白有交【jiāo】叉反应,其【qí】次【cì】是【shì】与其它细胞【bāo】因子间有无交叉。

 

2.McAb的Ig类与亚类的鉴定

一般在用酶【méi】标或荧光【guāng】素标记的第【dì】二抗体进行筛选时已经基【jī】本上确【què】定【dìng】了【le】抗体的Ig类型【xíng】。如果用的是酶标或荧光素标记的兔抗鼠IgG或【huò】IgM,则检【jiǎn】测出来的抗体一般是【shì】IgG类【lèi】或IgM类【lèi】。至于亚类则需要用标准【zhǔn】抗亚类血【xuè】清系【xì】统作双扩或夹心ELISA来【lái】确定。在作双【shuāng】扩试验时,如加入【rù】适量的PEG(3%),更有利于沉淀【diàn】线的形成。

 

3.McAb中和活性的鉴定

用动物或【huò】细胞的保护实验【yàn】来确定McAb的生物【wù】学活【huó】性。例如,如果确定抗病毒【dú】McAb的中【zhōng】和活性,则可【kě】用抗体和病毒同时接【jiē】种于易【yì】感的动物或敏感【gǎn】的细胞,来观【guān】察动物或细胞【bāo】是否得到抗【kàng】体的保护。

 

多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤: 

1、制备抗原。

2、选择实验动物。 

3、动物免疫。

4、试取血进行测试,看看是否成功免疫。

5、如果成功免疫,杀死实验动物,采集全部血清。

6、纯化出抗体。

7、鉴定抗体,包括纯度以及特异性。

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