生物材料准备

    生物材料【liào】冻存前进行的准备【bèi】工作可能会【huì】对冻存结果产生影响。对【duì】于非复制性材料，如组织，核酸和【hé】蛋【dàn】白等，准备【bèi】过【guò】程包括确认生物材料处于合适的溶【róng】液或冻存【cún】培养基中，此步骤的目的在于复苏时达到zui大化【huà】的预期用途【tú】。然而，活细【xì】胞和微生物的稳【wěn】定【dìng】性及【jí】复【fù】苏【sū】活力【lì】受生长条件和冻存前准备工【gōng】作【zuò】的影【yǐng】响。

    细胞冻存【cún】前需考虑【lǜ】多种因素，包括细胞类型、活力、生长条件、生【shēng】理【lǐ】状【zhuàng】态、数目以【yǐ】及细胞【bāo】前【qián】处理等。当建立一个新【xīn】分离【lí】株或【huò】细胞系的初【chū】次种子储备时，必须对培养物进行检测并消毒，确保微生物【wù】污染的zui小【xiǎo】化。每次准备工作后【hòu】，以【yǐ】及每次准备新批【pī】次【cì】的培【péi】养物时【shí】，均要重复这个步骤。

微生物

    生【shēng】长于通气培养条【tiáo】件下的微生物细胞，特【tè】别是细菌和【hé】酵【jiào】母，表现出比生长于【yú】非通气条件下【xià】的细胞更强的耐受冷却和冻存伤害 的能【néng】力。T.Nei 认【rèn】为，在通【tōng】气培养条件下，细胞通透性更【gèng】好，且开放条件【jiàn】下【xià】培养细胞在冷却过【guò】程中比非通气条件下培养的细胞失水【shuǐ】更快。另外，针对【duì】微生物【wù】细胞，在对数【shù】生长期后期及稳定期早期【qī】获得的细胞表现【xiàn】出更强【qiáng】的冰冻耐受性。从【cóng】生长后期和静态培养早期收集的微【wēi】生物细胞比【bǐ】生【shēng】长早期和生【shēng】长【zhǎng】晚期的细【xì】胞表现了【le】更强的冰【bīng】冻耐受【shòu】性【xìng】。

    一般来讲，初始【shǐ】冻存的细胞数目【mù】越多【duō】，复苏率【lǜ】越高。对于大多【duō】数【shù】细菌和【hé】酵【jiào】母而言【yán】，保证约【yuē】 107/ml 的细胞数才能确保【bǎo】足够【gòu】数量的【de】细胞复苏。由于这些细胞可【kě】便捷【jié】地从【cóng】琼脂培养板或【huò】斜面上【shàng】收集，如果需【xū】要更大【dà】量【liàng】的细胞【bāo】，也可使细【xì】胞生长于【yú】液体培养基【jī】中通过【guò】离心收集，在任【rèn】何一种情况下，细【xì】胞通【tōng】常悬浮在包含冻存保护【hù】剂的新鲜培养基中。原生【shēng】生物可以通过离心浓缩，但通常需要悬浮于使用的培养【yǎng】基中，之后使用等体【tǐ】积含冻存保护剂【jì】的【de】新鲜培养基稀释。

    针对芽孢菌冻存，需要【yào】收集【jí】芽【yá】孢并重【chóng】悬于含冻存保护【hù】剂的新鲜【xiān】培养基中。冻存前【qián】，必【bì】须缩短操作【zuò】时间且确保芽孢并【bìng】未萌【méng】发。针对非芽孢菌冻存【cún】，冻【dòng】存前需采【cǎi】用特殊程序收集菌丝体。某些具硬菌丝体的真菌【jun1】，需将【jiāng】含有菌【jun1】丝【sī】体的【de】琼脂【zhī】块从【cóng】培养基中切出，并将其【qí】置于含冻存保护剂的新鲜培养基中。硬【yìng】菌丝体无【wú】法与琼脂培养基很好【hǎo】粘附，生长于【yú】肉汤培养基中【zhōng】时，冻存前需将菌丝体团进行混【hún】合。

    冻存材料的【de】活【huó】力和复苏【sū】率【lǜ】由冻【dòng】存前后的【de】培养和【hé】生长状态决定。活【huó】力【lì】是衡量培【péi】养物生长和繁殖的一项指标。例如原生生物材料等【děng】某些材【cái】料，需经过多次传代才能保证其稳【wěn】定【dìng】性。复苏细胞数【shù】量的估【gū】算有多种【zhǒng】方法，包括连续【xù】稀【xī】释，平板计数或【huò】直接【jiē】细胞计【jì】数【shù】。通【tōng】过对比冻存前和复苏后【hòu】细【xì】胞【bāo】数量的差异，可说明细胞复苏程度 或冻存过程是否成功。