酶联【lián】免【miǎn】疫试剂盒是较普遍常用的药物残留检【jiǎn】测方【fāng】法，与仪器分析技术相比具有快【kuài】速、简【jiǎn】便、准确和【hé】灵【líng】敏度【dù】高等特点，但对实验操作条件的要求比较严格【gé】。实验条【tiáo】件主要由实验室的操作环境和操作人员的操作熟练程度两方面【miàn】组成，但ELISA试剂盒对实验室操【cāo】作环境的要求是几种药物残留检测方法中【zhōng】相对【duì】较【jiào】低的。由【yóu】于大【dà】部分【fèn】的试验操作步【bù】骤【zhòu】都是由实验人员来【lái】完成【chéng】的，人【rén】为【wéi】的【de】误差【chà】相对【duì】严重一些【xiē】。本人结合几年的工作实践介绍【shào】一下进【jìn】行【háng】ELISA操【cāo】作的时候应【yīng】该注意的问题。

 酶联免疫试剂盒操作的通用的规则
1 .要确保微量加样器的【de】准确性，可以使用蒸馏【liú】水和电【diàn】子天平进行确定(由【yóu】于蒸馏水不【bú】含杂质【zhì】，温【wēn】度环境为20％左右时，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以【yǐ】看作【zuò】是0．2g)每【měi】一把微量【liàng】加样器都应【yīng】该将其高量程和【hé】zui低量程进行【háng】确【què】定。
2. 在使用微【wēi】量加样器【qì】时，吸取不同瓶【píng】子【zǐ】中液体后要【yào】更换枪头，即使吸取标【biāo】准品【pǐn】溶液。
3. 吸取液【yè】体时速度不易太快，以免【miǎn】产生气泡【pào】，吸取【qǔ】的量【liàng】不够准确。
4. 将液体【tǐ】加【jiā】到【dào】酶标孔中时，避免【miǎn】枪头【tóu】和【hé】孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孑L壁【bì】接触【chù】，液【yè】滴会自然流下去。吸入【rù】液体时的【de】的【de】方法是吸两档打一档，防止由于【yú】枪头的毛细作【zuò】用使得部【bù】分液体不能流出而造成的【de】误差。
5. 吸【xī】取【qǔ】液体时要选用【yòng】量程和需要【yào】量接近的微量加样器吸，减少误【wù】差【chà】。
6 .液体全部加入酶标孔后，将酶标板放在【zài】桌子上【shàng】平行轻【qīng】轻【qīng】摇晃30s，使液【yè】体充分【fèn】混合均匀，也使其【qí】得到充分的【de】反【fǎn】应。
7. 孵育【yù】时要使盖板膜封好酶标板，防【fáng】止水【shuǐ】分蒸发，以防曲线不成【chéng】线性。
8 .实验前【qián】30min将试剂盒中的所有【yǒu】试剂从冰【bīng】箱取【qǔ】出，使试剂盒中的所有试【shì】剂【jì】与提取好的【de】样品溶液的温度相同【tóng】，酶标板只要【yào】取出所需量【liàng】。
9. 由于底物显色剂对光及其敏感，因此要避光保存。
10 .手【shǒu】工洗板【bǎn】时每【měi】次加入洗涤液【yè】后。应静置15～30s，不【bú】要将【jiāng】一个酶标孑L中的洗涤液溅入【rù】另一酶标孔【kǒng】中，防止交叉污染【rǎn】。甩去洗涤液【yè】后将酶标板放在毛【máo】巾或吸水纸【zhǐ】上拍干。
11 .检测吸光度前应将酶标仪打开，将其预热30min以上。
12. 底物为TMB，避免与皮肤相接【jiē】触。终【zhōng】止【zhǐ】液【yè】为2tool的浓硫酸具有腐蚀【shí】性【xìng】，应尽量避免接触皮肤
13 .孵育的时间应该严格按照试剂盒说明书上的时间为准。
14 .要尽量【liàng】做双孔实验，这样才既能保【bǎo】证数据【jù】的准【zhǔn】确性，又能反【fǎn】映出试【shì】剂盒的精密度。
15. 对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。
16 .没有去离【lí】子【zǐ】水【shuǐ】或双蒸水时，可以使用娃哈哈【hā】纯净水配制溶液，切勿使用【yòng】自来【lái】水。