山羊内皮素1(ET-1)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

6ng/L - 160ng/L

山羊内皮素1(ET-1)酶联免疫分析试剂盒使用说明书使用目的：

本试剂盒用【yòng】于【yú】测定【dìng】山羊血清、血浆及相关液体样本中内皮素【sù】1(ET-1)含量。

实验原理

本试剂【jì】盒【hé】应用双抗体夹【jiá】心【xīn】法测定标本中山羊内【nèi】皮【pí】素1(ET-1)水平。用纯【chún】化【huà】的山羊内皮素【sù】1(ET-1)抗体包被【bèi】微【wēi】孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微【wēi】孔中依次加入内皮素1(ET-1)，再与HRP标记的内【nèi】皮素1(ET-1)抗体结合，形成抗【kàng】体-抗原【yuán】-酶标抗体复合物【wù】，经过*洗涤【dí】后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催【cuī】化下转化成【chéng】蓝色，并在酸的作用【yòng】下转【zhuǎn】化成【chéng】终的。颜色【sè】的深【shēn】浅和【hé】样【yàng】品中的内皮素1(ET-1)呈正相关。用酶【méi】标仪在450nm波【bō】长下测定吸【xī】光度（OD值），通过【guò】标准曲【qǔ】线计算样【yàng】品中山羊内皮【pí】素【sù】1(ET-1)浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本采集后【hòu】尽早进行【háng】提取，提取按相关【guān】文【wén】献进行，提取后应尽【jìn】快进【jìn】行实验。若【ruò】不能马上进行试验，可【kě】将标本放【fàng】于-20℃保存【cún】，但应避免反复冻融

2．不能检测【cè】含NaN3的样品，因【yīn】NaN3抑制辣根过氧化【huà】物酶的（HRP）活性【xìng】。

山羊内皮素1(ET-1)酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准品的稀释【shì】：本试【shì】剂盒提【tí】供原倍【bèi】标【biāo】准品一支，用户可按照下【xià】列图表在小【xiǎo】试管中进行稀释。

加样：分别【bié】设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各【gè】步操作相同【tóng】）、标准孔【kǒng】、待测样品【pǐn】孔。在【zài】酶标包被板上标准品准【zhǔn】确加样50μl，待测样品孔中【zhōng】先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品【pǐn】终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标【biāo】板孔【kǒng】底【dǐ】部，尽量【liàng】不【bú】触及孔【kǒng】壁【bì】，轻轻晃动混匀。

温【wēn】育【yù】：用【yòng】封板【bǎn】膜封板后置37℃温育30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗【xǐ】涤：小【xiǎo】心揭掉封【fēng】板膜，弃去液体，甩干，每孔加【jiā】满洗【xǐ】涤液，静置30秒【miǎo】后弃去，如此重复【fù】5次，拍【pāi】干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显【xiǎn】色剂B50μl，轻轻震荡混匀【yún】，37℃避【bì】光【guāng】显色10分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以【yǐ】空白空调【diào】零，450nm波长依【yī】序测量【liàng】各孔的吸光度【dù】（OD值）。 测定应在加终止【zhǐ】液后15分【fèn】钟以内【nèi】进行。

操作程序总结：

计算

  以标准物的【de】浓度为【wéi】横坐标，OD值为纵坐标，在坐【zuò】标纸【zhǐ】上绘出标【biāo】准曲线，根据样【yàng】品的OD值由标准曲【qǔ】线查出相应【yīng】的【de】浓【nóng】度；再乘【chéng】以【yǐ】稀【xī】释倍数；或用【yòng】标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归【guī】方程【chéng】式，将样品的【de】OD值【zhí】代入【rù】方程式，计算出【chū】样品浓度，再乘【chéng】以稀释倍数，即为样品的实际浓度【dù】。

山羊内皮素1(ET-1)酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从【cóng】冷【lěng】藏环境中取出应【yīng】在室温【wēn】平【píng】衡9-21分钟后方【fāng】可使用，酶标包被板【bǎn】开封后【hòu】如未用完，板条应装入密封袋中【zhōng】保存。

2．浓洗涤液可能会【huì】有结晶【jīng】析【xī】出，稀释时【shí】可在水浴中加温【wēn】助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步【bù】加【jiā】样均应【yīng】使用【yòng】加样【yàng】器，并经常校对其【qí】准确性，以避【bì】免【miǎn】试验误差。一次加【jiā】样【yàng】时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使【shǐ】用排枪加样。

请每【měi】次测【cè】定的同时做标【biāo】准【zhǔn】曲线，做复孔。如标【biāo】本【běn】中【zhōng】待测物【wù】质含量过高（样本OD值大【dà】于标准品孔孔【kǒng】的OD值），请【qǐng】先【xiān】用样【yàng】品稀释液稀释一定倍数（n倍【bèi】）后再测定，计算时请后乘以总稀释【shì】倍数【shù】（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按【àn】照说明书的操【cāo】作进【jìn】行，试验结果判定必须以酶标仪【yí】读数为【wéi】准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月