植物抗坏血酸氧化酶(ASO)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

3U/L -120U/L

使用目的：

本试剂盒用于【yú】测定植物组织，细【xì】胞及其它相关样本【běn】中抗坏【huài】血酸【suān】氧化酶【méi】(ASO)含量。

植物抗坏血酸氧化酶(ASO)酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本试剂盒【hé】应用双抗体夹心法测定标本中植物抗【kàng】坏血【xuè】酸氧化酶(ASO)水【shuǐ】平【píng】。用纯【chún】化的植物抗坏血【xuè】酸氧化酶(ASO)抗体包被【bèi】微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔【kǒng】中依次加入抗坏血酸【suān】氧化酶(ASO)，再与HRP标【biāo】记【jì】的抗坏血酸氧【yǎng】化酶(ASO)抗【kàng】体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复【fù】合【hé】物，经过*洗涤后加底物【wù】TMB显色。TMB在【zài】HRP酶的催【cuī】化下【xià】转化成蓝色【sè】，并在酸的【de】作用下转【zhuǎn】化成终的。颜色的深浅和样品中的【de】植物【wù】抗坏血酸氧【yǎng】化【huà】酶(ASO)呈正相关。用酶【méi】标仪在【zài】450nm波长【zhǎng】下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算【suàn】样【yàng】品中植物抗坏血酸氧【yǎng】化【huà】酶(ASO)浓度【dù】。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本采集后尽早进【jìn】行提取，提取按相关文【wén】献进行，提取【qǔ】后应尽快进行实验。若不能马上进行【háng】试【shì】验，可将标【biāo】本放于-20℃保存【cún】，但【dàn】应【yīng】避【bì】免反复冻融【róng】

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑【yì】制【zhì】辣根【gēn】过氧化物【wù】酶的（HRP）活性。

植物抗坏血酸氧化酶(ASO)酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准品【pǐn】的稀释：本试【shì】剂盒提供原倍标准品一支【zhī】，用户可【kě】按【àn】照下列图表【biǎo】在小试管中进行稀【xī】释。

加样：分【fèn】别设空白【bái】孔（空【kōng】白对照孔不加样品及【jí】酶标【biāo】试【shì】剂，其【qí】余各【gè】步操作相同）、标准孔、待测样【yàng】品孔。在酶标包被板【bǎn】上标准品准【zhǔn】确加样【yàng】50μl，待测【cè】样【yàng】品孔【kǒng】中先加样品稀释【shì】液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释【shì】度为5倍）。加样将样【yàng】品加【jiā】于酶标板【bǎn】孔底部，尽量不触及【jí】孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用【yòng】封板膜封板后【hòu】置37℃温育【yù】30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤【dí】：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩【shuǎi】干，每【měi】孔加满洗涤液，静置30秒后弃去【qù】，如此重【chóng】复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先【xiān】加入显色剂【jì】A50μl，再加入显色剂【jì】B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色【sè】15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测【cè】定：以空白空调零，450nm波【bō】长依序测量各孔的吸光度【dù】（OD值）。 测【cè】定应【yīng】在【zài】加终止液后15分钟以【yǐ】内进【jìn】行。

植物抗坏血酸氧化酶(ASO)酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作程序总结：

计算

  以标准物的浓度【dù】为【wéi】横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘【huì】出【chū】标准曲线，根据样品【pǐn】的OD值由标准曲【qǔ】线查出相【xiàng】应的浓度；再【zài】乘以稀释【shì】倍数；或用标准物的浓度与OD值计算【suàn】出【chū】标准【zhǔn】曲【qǔ】线的【de】直【zhí】线回归方程式【shì】，将【jiāng】样品的OD值【zhí】代入方程式，计算【suàn】出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样【yàng】品【pǐn】的实际浓度。

植物抗坏血酸氧化酶(ASO)酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从冷藏环【huán】境中取出【chū】应在室温平衡【héng】9-21分钟【zhōng】后【hòu】方可使【shǐ】用，酶标包被板开封后如未用完，板【bǎn】条应装入密封【fēng】袋中保存。

2．浓【nóng】洗涤液可能会【huì】有结晶【jīng】析出，稀释时【shí】可在水浴中加【jiā】温助溶，洗涤时不影响【xiǎng】结果。

3．各步加【jiā】样均应使用加样器，并经常校对【duì】其准确性，以避免试【shì】验【yàn】误差。一次【cì】加样时间控制在【zài】5分钟内，如标【biāo】本【běn】数量多，推荐使用排枪加【jiā】样。

请每【měi】次测定的同时做标准曲线，做复孔【kǒng】。如标本中待测物【wù】质【zhì】含量过【guò】高（样本【běn】OD值【zhí】大【dà】于【yú】标准品孔孔的OD值），请先用样品【pǐn】稀释液稀【xī】释一定【dìng】倍【bèi】数【shù】（n倍）后再测定，计算时【shí】请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格【gé】按照【zhào】说明【míng】书的操作进行，试验结果判定【dìng】必须以酶标仪读【dú】数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月