小鼠超氧化物歧化酶（SOD）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：  96T

5 U/mL - 130 U/mL

使用目的：

本试剂盒用于【yú】测定小鼠血【xuè】清、血【xuè】浆及【jí】相关液体样本中超氧化物歧【qí】化酶（SOD）活性。

小鼠超氧化物歧化酶（SOD）酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本试【shì】剂盒应【yīng】用双抗体夹心法测定标本中小鼠【shǔ】超氧【yǎng】化物歧化【huà】酶（SOD）水【shuǐ】平。用纯化的小鼠超【chāo】氧化物歧化【huà】酶（SOD）抗体包被微孔板，制成【chéng】固相抗体，往包被单抗的微孔中依【yī】次加【jiā】入超氧化物歧化酶（SOD），再与HRP标记的超【chāo】氧化物歧化酶（SOD）抗体结合，形成抗体【tǐ】-抗原-酶标抗体复合物，经过【guò】*洗涤【dí】后【hòu】加底物TMB显色。TMB在【zài】HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下【xià】转化【huà】成终的。颜色【sè】的深浅和【hé】样【yàng】品中的【de】超氧化【huà】物歧化酶（SOD）呈正【zhèng】相关【guān】。用酶标仪【yí】在450nm波长下测定吸【xī】光【guāng】度（OD值），通过【guò】标准【zhǔn】曲【qǔ】线计算样品中小鼠【shǔ】超氧化【huà】物歧化酶（SOD）活性浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本采集【jí】后【hòu】尽早进行提取，提取【qǔ】按相【xiàng】关文献进行【háng】，提取【qǔ】后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标【biāo】本放于-20℃保存，但应【yīng】避免反【fǎn】复冻融

2．不能检测含【hán】NaN3的样品【pǐn】，因NaN3抑制【zhì】辣根过氧化物【wù】酶的（HRP）活性。

小鼠超氧化物歧化酶（SOD）酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准品的稀释【shì】：本试剂盒提供原【yuán】倍标【biāo】准品【pǐn】一支，用户可按照【zhào】下列图表【biǎo】在小试【shì】管中进行稀释。

加样：分别设空白孔（空【kōng】白对照孔不加样品及酶标试剂，其【qí】余【yú】各步操作相同）、标【biāo】准孔、待测【cè】样品孔。在酶标包【bāo】被板【bǎn】上标准品准确【què】加样【yàng】50μl，待测样品孔中【zhōng】先【xiān】加样【yàng】品稀释液【yè】40μl，然后【hòu】再【zài】加待测样品【pǐn】10μl（样品终稀【xī】释度为5倍）。加样将样品加于【yú】酶标板孔底部，尽【jìn】量不触及孔壁【bì】，轻轻【qīng】晃动混匀。

温【wēn】育【yù】：用封板膜封板【bǎn】后置37℃温育30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜【mó】，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液【yè】，静置【zhì】30秒后弃去，如【rú】此重复【fù】5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔【kǒng】先加入显色剂A50μl，再加入显色剂【jì】B50μl，轻轻【qīng】震荡混匀，37℃避光显色10分【fèn】钟【zhōng】.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以【yǐ】空白空调【diào】零，450nm波长依【yī】序测【cè】量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进【jìn】行。

操作程序总结：

计算

  以标准【zhǔn】物的浓度为横【héng】坐标【biāo】，OD值为纵【zòng】坐标【biāo】，在坐标纸上绘【huì】出【chū】标准曲线【xiàn】，根据样品【pǐn】的【de】OD值由标准【zhǔn】曲线查出相【xiàng】应【yīng】的浓度；再【zài】乘以稀释倍数；或用【yòng】标准物的浓度【dù】与OD值计【jì】算出标准曲线的直线回归方程式【shì】，将样品的OD值代【dài】入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍【bèi】数，即【jí】为样品【pǐn】的实际浓度。

小鼠超氧化物歧化酶（SOD）酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取【qǔ】出【chū】应【yīng】在室【shì】温平衡9-21分钟后方可使用，酶【méi】标包【bāo】被【bèi】板开封后如未用完，板【bǎn】条应【yīng】装入密封袋【dài】中保存。

2．浓洗涤液可能会有【yǒu】结晶析出，稀释时可在【zài】水【shuǐ】浴【yù】中加温助溶，洗涤时不【bú】影响结果【guǒ】。

3．各步加样均【jun1】应使用加样器【qì】，并【bìng】经常校对其准确性，以避免【miǎn】试验【yàn】误差。一次【cì】加【jiā】样时间控制在5分钟【zhōng】内，如标【biāo】本数【shù】量多，推荐使用排枪加样。

请每【měi】次测【cè】定的同时做标准曲线【xiàn】，做复孔。如标本【běn】中待测物质含量过高（样【yàng】本【běn】OD值大于标准品孔孔的【de】OD值），请先用样品稀释液稀释一定【dìng】倍数（n倍【bèi】）后再测定，计算时【shí】请【qǐng】后乘【chéng】以总稀释【shì】倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照【zhào】说明书的操作进行，试验结果判定必【bì】须以【yǐ】酶标仪【yí】读数为准【zhǔn】.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月