植物表皮生长因子（EGF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

3ng/L -120 ng/L

使用目的：

本试【shì】剂盒【hé】用于【yú】测定植物【wù】组织【zhī】，细胞及其它相关样本【běn】中表皮生长因子（EGF）含量。

植物表皮生长因子（EGF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本试剂盒应用双【shuāng】抗体【tǐ】夹心法测【cè】定标本中植【zhí】物表【biǎo】皮【pí】生长因子（EGF）水【shuǐ】平。用【yòng】纯化的植物表皮生长因子（EGF）抗【kàng】体包被微【wēi】孔板，制【zhì】成固相【xiàng】抗体，往包【bāo】被单【dān】抗的【de】微【wēi】孔中【zhōng】依次加【jiā】入植物【wù】表皮生长因子（EGF），再与HRP标记的表皮生长因子（EGF）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤【dí】后加底物TMB显色【sè】。TMB在HRP酶【méi】的催化下【xià】转化成【chéng】蓝色，并在酸的作【zuò】用下【xià】转化成终的。颜色的深浅和样品中的植【zhí】物表皮生长因子（EGF）呈【chéng】正相关。用酶标【biāo】仪在450nm波长下测定吸光【guāng】度（OD值），通【tōng】过【guò】标准曲【qǔ】线计算样【yàng】品【pǐn】中植物【wù】表皮【pí】生长因子（EGF）浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本采集后【hòu】尽早进行提取，提取【qǔ】按相关【guān】文献进【jìn】行，提取后【hòu】应尽快进行实验【yàn】。若不能【néng】马上进行试验，可将标本【běn】放【fàng】于-20℃保存，但应【yīng】避免反复冻【dòng】融

2．不【bú】能检测【cè】含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧【yǎng】化物酶的【de】（HRP）活【huó】性【xìng】。

植物表皮生长因子（EGF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准品【pǐn】的稀释：本【běn】试剂盒提供原倍标【biāo】准品一支，用户可按照【zhào】下列图【tú】表在小试管中【zhōng】进行稀【xī】释【shì】。

加样：分别设空白孔【kǒng】（空白对照孔不加样品【pǐn】及酶标试剂【jì】，其余【yú】各步操作相同）、标准孔、待测样【yàng】品孔。在酶【méi】标包被【bèi】板上标准品【pǐn】准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释【shì】液【yè】40μl，然后再加待测样品10μl（样品终【zhōng】稀释度为5倍【bèi】）。加样将样品加于酶标【biāo】板孔【kǒng】底部，尽【jìn】量不【bú】触及孔壁【bì】，轻轻晃动混匀。

温育【yù】：用封【fēng】板膜封【fēng】板后置37℃温育30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗【xǐ】涤：小心揭【jiē】掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤【dí】液，静置30秒【miǎo】后弃去【qù】，如此【cǐ】重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔【kǒng】先加入【rù】显色剂A50μl，再加入显色剂【jì】B50μl，轻轻【qīng】震荡【dàng】混匀，37℃避【bì】光显【xiǎn】色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以空白空【kōng】调零，450nm波【bō】长依序测【cè】量【liàng】各【gè】孔的吸【xī】光度（OD值【zhí】）。 测【cè】定【dìng】应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算

  以标准物的【de】浓度为【wéi】横坐标【biāo】，OD值为【wéi】纵坐标，在坐【zuò】标纸上绘出标准【zhǔn】曲线，根【gēn】据样【yàng】品的【de】OD值由标准曲线【xiàn】查出【chū】相应【yīng】的浓度；再【zài】乘以稀释倍数【shù】；或用标准物的浓度【dù】与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代【dài】入【rù】方【fāng】程式，计【jì】算出样品浓度，再【zài】乘以稀释倍数，即为样品【pǐn】的实际浓度。

植物表皮生长因子（EGF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从【cóng】冷【lěng】藏环境中取出【chū】应在室【shì】温【wēn】平衡【héng】9-21分钟后【hòu】方可使用，酶【méi】标包被板开【kāi】封后如未用完，板条应【yīng】装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出【chū】，稀【xī】释【shì】时可在水浴中加温助溶，洗涤【dí】时不影【yǐng】响结果【guǒ】。

3．各【gè】步加样均【jun1】应使用【yòng】加样器【qì】，并经【jīng】常【cháng】校对其准确性，以避免试验误差【chà】。一【yī】次【cì】加样时【shí】间控【kòng】制在5分钟内，如标本数量多，推荐使【shǐ】用排枪加样。

请每【měi】次测定的同时做标准曲线【xiàn】，做复【fù】孔。如标本【běn】中待测物质含量过高（样本OD值大于标【biāo】准品【pǐn】孔【kǒng】孔的OD值），请先【xiān】用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后【hòu】再【zài】测定，计算【suàn】时请后乘以总稀【xī】释倍【bèi】数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格【gé】按照说明书的【de】操作进行，试验结果判【pàn】定必须以酶标【biāo】仪读数为准【zhǔn】.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月