人酪氨酸羟化酶(TH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

50pg/ml - 1800pg/ml

使用目的：

本【běn】试剂盒用于测定【dìng】人【rén】血清【qīng】、血浆【jiāng】及相关液体样本中酪氨酸【suān】羟化酶(TH)含量。

人酪氨酸羟化酶(TH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本试剂盒【hé】应【yīng】用双【shuāng】抗体夹心法测定【dìng】标本【běn】中人【rén】酪【lào】氨酸羟化酶【méi】(TH)水平。用纯化【huà】的人酪氨酸【suān】羟化酶(TH)抗体包被微【wēi】孔【kǒng】板，制成固相抗体，往包被【bèi】单抗的微孔中【zhōng】依次【cì】加【jiā】入酪氨酸羟化酶(TH)，再与HRP标记【jì】的酪氨【ān】酸羟化酶(TH)抗体【tǐ】结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后【hòu】加【jiā】底物TMB显【xiǎn】色。TMB在HRP酶的催化下转【zhuǎn】化成蓝【lán】色，并在酸【suān】的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的酪氨【ān】酸羟化酶【méi】(TH)呈正相关。用酶标仪【yí】在450nm波【bō】长下测定吸光度（OD值），通过【guò】标准【zhǔn】曲线计算【suàn】样【yàng】品中【zhōng】人酪氨酸羟化酶(TH)的浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本采集后尽早进行提取，提【tí】取【qǔ】按相关文【wén】献进行【háng】，提取后应尽快进行实验【yàn】。若不能马上进【jìn】行【háng】试验，可将标本放于-20℃保存，但【dàn】应避免反【fǎn】复冻融

2．不能检测【cè】含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根【gēn】过氧化物【wù】酶的【de】（HRP）活性。

人酪氨酸羟化酶(TH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准【zhǔn】品【pǐn】的稀释【shì】：本【běn】试剂盒提供原倍【bèi】标准品一支，用户可按照【zhào】下列图表在小试管中进【jìn】行稀释。

加样：分【fèn】别设【shè】空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余【yú】各【gè】步操作相同【tóng】）、标准孔、待测样品【pǐn】孔。在酶标包被板上【shàng】标准品【pǐn】准确加样50μl，待测样品孔中先加样【yàng】品稀释液40μl，然后再加待【dài】测样【yàng】品【pǐn】10μl（样品终稀【xī】释度为【wéi】5倍）。加样【yàng】将样品加【jiā】于酶【méi】标板【bǎn】孔底部【bù】，尽量不触及【jí】孔壁，轻轻晃动混匀。
温育【yù】：用封板膜封板后置【zhì】37℃温育30分钟【zhōng】。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板【bǎn】膜，弃去液体【tǐ】，甩干，每孔【kǒng】加满洗涤液，静置30秒后弃去【qù】，如此重【chóng】复5次，拍【pāi】干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔【kǒng】先加入显色【sè】剂A50μl，再加【jiā】入显色【sè】剂B50μl，轻轻震【zhèn】荡混匀，37℃避光显色10分钟【zhōng】.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以空白空【kōng】调【diào】零，450nm波长【zhǎng】依序测量各孔的吸光度【dù】（OD值【zhí】）。 测定应【yīng】在加终止【zhǐ】液后15分钟以内【nèi】进行。

操作程序总结：

计算

  以标准物的浓度【dù】为【wéi】横坐标，OD值为【wéi】纵坐标，在坐标纸上绘【huì】出标准【zhǔn】曲线，根据【jù】样品的OD值由标准【zhǔn】曲线查【chá】出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准【zhǔn】物【wù】的浓【nóng】度与OD值【zhí】计算【suàn】出标准曲【qǔ】线的直【zhí】线回归方程【chéng】式，将样品的OD值代入方程【chéng】式，计算出样品浓【nóng】度，再乘【chéng】以稀释倍【bèi】数【shù】，即为样品的实际【jì】浓度。

人酪氨酸羟化酶(TH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒【hé】从冷藏【cáng】环境中取出应在室温平衡9-21分【fèn】钟【zhōng】后方可使用，酶标包被板开封后如未【wèi】用完，板【bǎn】条【tiáo】应装入密封袋中保【bǎo】存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析【xī】出，稀释时【shí】可在【zài】水浴【yù】中【zhōng】加温助溶，洗【xǐ】涤时不影响结【jié】果。

3．各步【bù】加【jiā】样均应使用加样器，并经常校对其【qí】准确性，以避【bì】免试验【yàn】误差。一次加样时间控【kòng】制【zhì】在5分钟内，如标本【běn】数【shù】量多，推荐使用排枪加样。

请每次【cì】测定的同时做标准曲线【xiàn】，做【zuò】复孔。如标本中待测物质【zhì】含【hán】量过高（样本OD值大于标准【zhǔn】品【pǐn】孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数【shù】（n倍）后【hòu】再【zài】测【cè】定，计算时【shí】请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格【gé】按照说明书的操作进行【háng】，试【shì】验【yàn】结果判【pàn】定必须【xū】以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月