猪幽门螺旋菌（HP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

2ng/L -90ng/L

使用目的：

本试剂盒用于测定猪【zhū】血清【qīng】,血浆【jiāng】及相关液【yè】体样【yàng】本中幽门螺旋菌（HP）含量。

猪幽门螺旋菌（HP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本试剂盒应用【yòng】双抗体夹心【xīn】法测定标本中猪幽门螺旋【xuán】菌【jun1】（HP）水平。用纯【chún】化的幽门【mén】螺旋菌（HP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依【yī】次【cì】加入幽门【mén】螺旋【xuán】菌（HP），再与HRP标记的幽门螺旋菌（HP）抗【kàng】体结合，形成【chéng】抗【kàng】体-抗原-酶【méi】标抗体复合【hé】物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在【zài】HRP酶的催化下转化成蓝色【sè】，并在酸的作用下【xià】转【zhuǎn】化成【chéng】终的。颜【yán】色的深浅和样【yàng】品中【zhōng】的【de】幽门螺旋菌（HP）呈正【zhèng】相关。用酶标仪在450nm波【bō】长下测【cè】定吸光度【dù】（OD值），通过标【biāo】准曲线【xiàn】计算样【yàng】品中猪幽【yōu】门螺旋菌（HP）浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标【biāo】本采集后尽早进行提取，提取按相【xiàng】关文献进【jìn】行，提取后应【yīng】尽【jìn】快进行【háng】实验【yàn】。若不能马上进行【háng】试验【yàn】，可将标【biāo】本放于-20℃保存，但应【yīng】避免反复冻融【róng】

2．不能检测含NaN3的样品，因【yīn】NaN3抑制辣根过氧【yǎng】化物酶【méi】的（HRP）活【huó】性【xìng】。

猪幽门螺旋菌（HP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准品的稀【xī】释：本试【shì】剂盒提【tí】供原倍【bèi】标准【zhǔn】品一支，用户可按照下列【liè】图表在【zài】小试管中进行稀释。

加样：分【fèn】别设空【kōng】白孔（空白对【duì】照孔不加样【yàng】品及【jí】酶标【biāo】试剂，其余各步操作相同）、标准【zhǔn】孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品【pǐn】孔【kǒng】中先【xiān】加样【yàng】品稀释液【yè】40μl，然后再【zài】加待测【cè】样品10μl（样【yàng】品终稀释【shì】度为5倍）。加样将样品加于酶标板【bǎn】孔【kǒng】底部，尽量不触及【jí】孔壁，轻【qīng】轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗【xǐ】涤：小心揭掉【diào】封【fēng】板膜，弃去液体【tǐ】，甩【shuǎi】干，每孔加满洗【xǐ】涤液【yè】，静置30秒【miǎo】后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显【xiǎn】色：每【měi】孔先加入显色【sè】剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混【hún】匀，37℃避光显色10分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以空白【bái】空【kōng】调零，450nm波【bō】长依序测量各【gè】孔【kǒng】的【de】吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算

  以标准物的浓度为【wéi】横坐标，OD值为【wéi】纵坐【zuò】标，在坐标【biāo】纸上绘出标【biāo】准曲线【xiàn】，根据样品的OD值【zhí】由标准曲线查出相应的浓度；再【zài】乘以稀释倍数【shù】；或【huò】用标【biāo】准物的浓度【dù】与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样【yàng】品的OD值代入方【fāng】程式【shì】，计算出样【yàng】品浓度【dù】，再乘以稀释倍数【shù】，即为样【yàng】品的实际浓度。

猪幽门螺旋菌（HP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从冷藏环境【jìng】中取【qǔ】出应在室温平衡9-21分钟后方可使用，酶标【biāo】包被板【bǎn】开封后如未用【yòng】完【wán】，板条【tiáo】应装【zhuāng】入密封袋中保【bǎo】存。

2．浓洗涤液可【kě】能会【huì】有结晶析出，稀释时可【kě】在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果【guǒ】。

3．各步【bù】加【jiā】样均应使用加样器，并经常校对其准确【què】性，以【yǐ】避免试验误差【chà】。一次加【jiā】样时间控【kòng】制在5分【fèn】钟内，如【rú】标本数量多，推荐使用排枪加样【yàng】。

请每次测定【dìng】的【de】同时做标【biāo】准曲线，做复孔【kǒng】。如标本中待测物质含量过高（样本【běn】OD值大于【yú】标准品孔孔的【de】OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数【shù】（n倍）后再【zài】测【cè】定，计算【suàn】时请后乘以【yǐ】总【zǒng】稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说【shuō】明书的操作进行，试【shì】验结果判定【dìng】必须【xū】以【yǐ】酶标仪读数为【wéi】准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月