人醛糖还原酶（AR）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

0.8 U/L - 40U/L

使用目的：

本试剂盒用【yòng】于测定人血清【qīng】、血浆及相【xiàng】关【guān】液体样本中醛糖还原酶（AR）含量。

人醛糖还原酶（AR）酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本试【shì】剂盒应用【yòng】双抗体夹心法测定【dìng】标本中【zhōng】人醛糖【táng】还原酶（AR）水平。用纯化的人醛糖【táng】还原酶（AR）抗体包被微孔板，制成固相抗【kàng】体，往【wǎng】包被单抗的【de】微【wēi】孔中依次加入醛糖还原酶（AR），再【zài】与HRP标记的醛【quán】糖还原【yuán】酶【méi】（AR）抗体结【jié】合，形成【chéng】抗体-抗原-酶标抗体复【fù】合物，经【jīng】过*洗涤后加底物【wù】TMB显色【sè】。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并【bìng】在酸的作用下【xià】转化成终【zhōng】的。颜色的深浅和样品中【zhōng】的醛糖还【hái】原【yuán】酶（AR）呈【chéng】正相关。用【yòng】酶标仪在450nm波长下【xià】测定吸【xī】光度（OD值），通【tōng】过标准曲线【xiàn】计【jì】算样品【pǐn】中人【rén】醛糖【táng】还原酶【méi】（AR）浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本【běn】采【cǎi】集【jí】后尽早进行提取【qǔ】，提【tí】取按相关文献进【jìn】行【háng】，提取后应尽【jìn】快进行实验。若【ruò】不能【néng】马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融【róng】

2．不【bú】能【néng】检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧【yǎng】化物【wù】酶的（HRP）活性。

人醛糖还原酶（AR）酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准【zhǔn】品的稀释：本试剂盒提供原【yuán】倍【bèi】标准【zhǔn】品一支，用【yòng】户可按照下列【liè】图表在小【xiǎo】试管中进行稀【xī】释。

加样【yàng】：分别【bié】设空【kōng】白【bái】孔【kǒng】（空【kōng】白对照孔不加【jiā】样【yàng】品及【jí】酶【méi】标试剂，其余【yú】各步操【cāo】作相同）、标【biāo】准孔、待测样【yàng】品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液【yè】40μl，然后再【zài】加待测样品【pǐn】10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加【jiā】于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

温育：用封板膜封【fēng】板后置【zhì】37℃温育30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小【xiǎo】心【xīn】揭掉封板膜，弃去液【yè】体，甩干【gàn】，每孔加满【mǎn】洗涤液，静置【zhì】30秒【miǎo】后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色【sè】剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻【qīng】轻震荡混匀【yún】，37℃避光显色10分钟【zhōng】.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定【dìng】：以空【kōng】白空【kōng】调零，450nm波长依序测【cè】量各孔的吸【xī】光【guāng】度（OD值）。 测定应【yīng】在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算

  以标【biāo】准【zhǔn】物的【de】浓度为横坐【zuò】标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘【huì】出标准曲【qǔ】线，根【gēn】据样品的OD值由标【biāo】准曲线【xiàn】查出相应的浓度；再乘以稀释【shì】倍数；或用标【biāo】准物的浓【nóng】度【dù】与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式【shì】，将样【yàng】品的OD值代入【rù】方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即【jí】为样品的实际浓度【dù】。

人醛糖还原酶（AR）酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从冷藏环【huán】境中取出应在【zài】室温平衡9-21分【fèn】钟【zhōng】后【hòu】方可【kě】使用【yòng】，酶标包被板开封后如未【wèi】用完，板条应装入密封【fēng】袋中保【bǎo】存。

2．浓洗涤【dí】液可能会有结晶析出，稀释时可在水【shuǐ】浴中【zhōng】加【jiā】温助溶【róng】，洗涤时不影响【xiǎng】结果。

3．各步加样【yàng】均应使用加样器，并【bìng】经常校对其准确性，以避免试验误差。一【yī】次加样【yàng】时间【jiān】控【kòng】制【zhì】在5分钟内，如标【biāo】本数量多，推荐使用排枪【qiāng】加样。

请每次测定【dìng】的同时【shí】做【zuò】标准【zhǔn】曲线，做复孔。如标本中待测物质含量【liàng】过高（样【yàng】本【běn】OD值大于标准品【pǐn】孔【kǒng】孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再【zài】测定，计算时请【qǐng】后乘以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严【yán】格按照【zhào】说【shuō】明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为【wéi】准【zhǔn】.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月