小鼠8-羟基鸟嘌呤（8-OHdG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

8.0 ng/L -240 ng/L

小鼠8-羟基鸟嘌呤（8-OHdG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书使用目的：

本试剂盒用于测定【dìng】小鼠血清、血【xuè】浆及相【xiàng】关液体样本中8-羟基鸟嘌呤（8-OHdG）含【hán】量【liàng】。

实验原理

本试【shì】剂盒应【yīng】用【yòng】双抗【kàng】体夹心法测定标本【běn】中【zhōng】小鼠8-羟基鸟嘌呤（8-OHdG）水平。用纯化的小【xiǎo】鼠8-羟【qiǎng】基鸟嘌呤【lìng】（8-OHdG）抗体包被微孔板【bǎn】，制成固【gù】相抗体，往包被单抗的微孔中依【yī】次【cì】加入8-羟基鸟嘌【piào】呤（8-OHdG），再与【yǔ】HRP标记的8-羟【qiǎng】基【jī】鸟嘌呤（8-OHdG）抗体结合，形【xíng】成抗体-抗原-酶标抗【kàng】体复【fù】合物，经过*洗涤后加底物TMB显【xiǎn】色。TMB在HRP酶的催化下【xià】转化成蓝色，并在酸【suān】的作用下【xià】转化成终的。颜色的深浅和样品中的【de】8-羟基【jī】鸟嘌呤（8-OHdG）呈正相关。用【yòng】酶标仪在450nm波【bō】长下测定吸光度（OD值），通过标【biāo】准曲【qǔ】线计算样品中【zhōng】小【xiǎo】鼠8-羟基【jī】鸟嘌【piào】呤（8-OHdG）浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本采集后【hòu】尽早进行提取，提取【qǔ】按【àn】相关文【wén】献【xiàn】进行，提取【qǔ】后应尽【jìn】快进行实验。若不能【néng】马【mǎ】上进行试验，可将标本放【fàng】于-20℃保存，但应避免反复冻【dòng】融

2．不能【néng】检测含NaN3的样【yàng】品，因NaN3抑制辣根过氧【yǎng】化物酶的【de】（HRP）活性。

小鼠8-羟基鸟嘌呤（8-OHdG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准品【pǐn】的稀释：本试剂盒提【tí】供原倍标准品一支，用户【hù】可按照【zhào】下【xià】列图表在小【xiǎo】试【shì】管【guǎn】中进行稀释。

加样【yàng】：分别设空【kōng】白孔（空白对照孔不加【jiā】样【yàng】品【pǐn】及酶【méi】标【biāo】试剂【jì】，其余各步操作【zuò】相同）、标准孔【kǒng】、待【dài】测样【yàng】品孔。在酶标包被板上【shàng】标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加【jiā】样【yàng】品稀释【shì】液40μl，然后再加待测样品【pǐn】10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加【jiā】于酶标板孔底部【bù】，尽量不【bú】触及孔壁【bì】，轻轻晃动混匀。
温育【yù】：用封板【bǎn】膜封板后置37℃温育30分钟【zhōng】。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤【dí】：小心揭掉封【fēng】板膜，弃去液体，甩干，每孔【kǒng】加【jiā】满洗涤液，静置30秒【miǎo】后弃去，如【rú】此重复【fù】5次【cì】，拍干【gàn】。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色【sè】剂A50μl，再【zài】加【jiā】入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显【xiǎn】色【sè】15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以空白空【kōng】调零，450nm波长【zhǎng】依序测量各孔的吸光度【dù】（OD值【zhí】）。 测定应【yīng】在【zài】加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算

  以【yǐ】标准【zhǔn】物的【de】浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标【biāo】纸上【shàng】绘出标准曲【qǔ】线，根据样品的OD值由标【biāo】准【zhǔn】曲线查出相应【yīng】的【de】浓度【dù】；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度【dù】与OD值计算出标准曲【qǔ】线的直线回归方【fāng】程式【shì】，将样品的OD值代入方程式【shì】，计【jì】算出样品浓度，再乘【chéng】以稀释倍【bèi】数，即为【wéi】样品的实际浓度。

小鼠8-羟基鸟嘌呤（8-OHdG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试【shì】剂【jì】盒从冷藏环境【jìng】中取出应在室【shì】温平衡9-21分钟后方可使用，酶【méi】标包被板开封【fēng】后如未用完，板【bǎn】条应【yīng】装【zhuāng】入密封袋中【zhōng】保存。

2．浓洗【xǐ】涤液可【kě】能会有结【jié】晶析出，稀释时可【kě】在水浴中【zhōng】加温【wēn】助溶，洗涤时不影【yǐng】响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避【bì】免试验【yàn】误【wù】差。一次加样时【shí】间【jiān】控【kòng】制在5分钟内【nèi】，如标本数量多【duō】，推荐【jiàn】使【shǐ】用排枪加样。

请每次测定的【de】同时做标准【zhǔn】曲线，做复孔【kǒng】。如标本中待【dài】测【cè】物质含量过高（样本OD值大【dà】于标准品孔孔【kǒng】的OD值），请【qǐng】先用【yòng】样品稀【xī】释【shì】液稀释一定倍【bèi】数（n倍）后再测定，计算时请后【hòu】乘以总稀释【shì】倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严【yán】格按照说明【míng】书的操【cāo】作进行【háng】，试验结果判定必须以酶【méi】标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月