羊布鲁氏菌（Brucellosis）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

1.5pg/ml-40pg/ml

使用目的：

本试【shì】剂【jì】盒用【yòng】于测定羊【yáng】血清【qīng】、血浆及相【xiàng】关液体样本中布鲁氏菌（Brucellosis）的含量。

羊布鲁氏菌（Brucellosis）酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本【běn】试剂盒【hé】应用双抗【kàng】体夹心法【fǎ】测定标【biāo】本中羊布鲁氏菌（Brucellosis）水平。用纯化的羊布鲁氏菌【jun1】（Brucellosis）抗体包被【bèi】微孔板，制成【chéng】固相抗体，往【wǎng】包【bāo】被单抗的微孔中依次加入布鲁氏【shì】菌（Brucellosis），再与【yǔ】HRP标记【jì】的布鲁氏菌（Brucellosis）抗体结合【hé】，形成抗体-抗原-酶【méi】标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催【cuī】化下转【zhuǎn】化成蓝色，并在酸【suān】的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中【zhōng】的布鲁氏菌（Brucellosis）呈【chéng】正相关。用【yòng】酶【méi】标【biāo】仪在450nm波长【zhǎng】下【xià】测定吸【xī】光【guāng】度（OD值【zhí】），通过【guò】标准曲线计算【suàn】样品中【zhōng】羊【yáng】布鲁氏菌（Brucellosis）浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本采集后尽早进【jìn】行提取，提【tí】取按相关文献进行，提【tí】取后应尽快【kuài】进行实验。若【ruò】不能马上进行【háng】试验，可将标本放于-20℃保存，但应【yīng】避免【miǎn】反复【fù】冻融

2．不能检【jiǎn】测含NaN3的样品，因【yīn】NaN3抑制辣【là】根过【guò】氧化物【wù】酶的（HRP）活性。

羊布鲁氏菌（Brucellosis）酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标【biāo】准品【pǐn】的稀释：本试【shì】剂盒【hé】提供原倍标准品一支，用户可按照【zhào】下列图表【biǎo】在小试管中进【jìn】行稀释。

加样：分别设空白孔【kǒng】（空白对照孔不加样品及【jí】酶标试剂，其余各步操作【zuò】相同【tóng】）、标准孔、待【dài】测样品孔。在【zài】酶标包被板【bǎn】上【shàng】标准【zhǔn】品准确加样【yàng】50μl，待测【cè】样品孔中先【xiān】加样品稀【xī】释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加【jiā】样将样品【pǐn】加【jiā】于【yú】酶标板孔底部【bù】，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封【fēng】板膜封板后置37℃温【wēn】育30分【fèn】钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心【xīn】揭掉封【fēng】板膜，弃去【qù】液【yè】体，甩干，每孔【kǒng】加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此【cǐ】重复5次【cì】，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔【kǒng】先加入显色剂A50μl，再加入【rù】显色剂B50μl，轻轻震【zhèn】荡混【hún】匀，37℃避光显色15分钟【zhōng】.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以空白【bái】空调【diào】零，450nm波长依序测量【liàng】各孔的吸光度【dù】（OD值）。 测定应【yīng】在【zài】加【jiā】终止液【yè】后15分钟以内进【jìn】行。

操作程序总结：

计算

  以标准物【wù】的浓度为横坐标，OD值【zhí】为【wéi】纵坐【zuò】标【biāo】，在【zài】坐【zuò】标纸【zhǐ】上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲【qǔ】线查出相应的浓度；再乘以【yǐ】稀释【shì】倍数；或用标准【zhǔn】物的浓度与OD值计算【suàn】出标准曲线的直线回【huí】归方程式，将样品的OD值代入【rù】方【fāng】程式【shì】，计算出样品浓度，再【zài】乘以【yǐ】稀【xī】释【shì】倍数【shù】，即为样品的实际浓度【dù】。

羊布鲁氏菌（Brucellosis）酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从冷【lěng】藏环境中取【qǔ】出应在【zài】室温【wēn】平衡9-21分钟后方可使用，酶标包被板【bǎn】开封后【hòu】如未【wèi】用完，板条应装入【rù】密封【fēng】袋中保存。

2．浓洗涤液可能【néng】会【huì】有结晶析出，稀释时可在水浴【yù】中加温助溶【róng】，洗涤时不【bú】影响结【jié】果【guǒ】。

3．各【gè】步【bù】加样【yàng】均应使用加样器，并【bìng】经常校对其准确【què】性，以避免试验误【wù】差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推【tuī】荐使用排枪【qiāng】加样。

请每次测定的同时做【zuò】标准曲【qǔ】线，做【zuò】复孔。如标【biāo】本【běn】中待【dài】测【cè】物质【zhì】含量过高（样本【běn】OD值大于标准品【pǐn】孔孔的【de】OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数【shù】（n倍）后再测【cè】定，计算时请后乘以【yǐ】总稀【xī】释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格【gé】按【àn】照说明书的操作【zuò】进行，试【shì】验结果判定【dìng】必须以酶标仪读数【shù】为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月