Elisa试剂盒以灵【líng】敏度较高、特【tè】异性较好【hǎo】的特点在【zài】上得到了广【guǎng】泛的应用，然而实【shí】验新手们面对各【gè】种各样、动【dòng】则上上千种的【de】Elisa试剂盒，内心应该是崩溃的。

Elisa试剂盒的操作

(一)检验方法

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取【qǔ】所【suǒ】需用【yòng】量酶【méi】标【biāo】板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对【duì】照【zhào】各2孔，未用的板条尽【jìn】快密封，2～8℃保存。

3.空【kōng】白对照孔加样品稀释液【yè】100μl；阴【yīn】、阳性【xìng】对照【zhào】孔分【fèn】别加入【rù】阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀【xī】释后的【de】样品100μl。

4.混匀，置37℃反应30分钟。

5.扣去孔【kǒng】内液体，每孔【kǒng】加满洗涤液，静置30秒后弃【qì】去，重【chóng】复洗【xǐ】涤5次，拍干。

6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔【kǒng】依【yī】次加底物液A、底物【wù】液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分【fèn】钟。

9.每孔【kǒng】加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于【yú】450nm(可用【yòng】630nm作参比【bǐ】波【bō】长)测定各孔吸光值(A值)。

(二)样品准备

1.取动物全血按【àn】常规方法制备血【xuè】清【qīng】，要求血清【qīng】清【qīng】亮，无溶【róng】血、无污【wū】染。样品1周内可于2～8℃保存【cún】，长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释(如2μl血清加入198μl样品稀释液中，混匀)。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗【xǐ】涤【dí】液使用前应恢复【fù】至室温使沉【chén】淀溶解，然后用蒸馏【liú】水或去【qù】离子【zǐ】水作20倍稀释。

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