大【dà】家在养细【xì】胞的时候【hòu】，想必大家也一定【dìng】遇到过细胞状态差这种情况，但是【shì】细【xì】胞状态差，有很【hěn】多种原因【yīn】造成。细胞状态很差，常常【cháng】出现【xiàn】的【de】现象是：细【xì】胞边缘不清晰【xī】、细胞不饱满、折光性差、背景比较脏【zāng】、黑点很【hěn】多、细胞碎【suì】片多【duō】（细胞凋亡后的细胞碎【suì】片）、单【dān】个细胞【bāo】内有空泡（凋亡【wáng】）且空泡【pào】比较多；如果细胞出现【xiàn】老化，也就是【shì】细胞比较扁平、增殖【zhí】减缓、细【xì】胞核体积增大、细胞突触变多【duō】，此【cǐ】时观察到【dào】的细胞状态也【yě】是不正【zhèng】常的。所以【yǐ】，除了考虑血清和【hé】细菌污染的问题，细胞【bāo】老化也不容忽视【shì】~

细胞老化的征兆：

一、细胞周期阻滞

长期的细胞周【zhōu】期【qī】阻滞是老化【huà】细【xì】胞的基本特征，也【yě】是体外【wài】鉴定细胞老化的指标。为【wéi】了检查细胞是否【fǒu】跃出了【le】细胞周【zhōu】期，人们通常检测增殖指【zhǐ】示分子Ki-67的表达丰【fēng】度；或者通过【guò】将与胸腺嘧啶【dìng】相似的溴脱氧尿【niào】mi啶（Bromodeoxyuridine，BrdU）掺【chān】入到细胞【bāo】培养基中，观察是否有新的DNA合成。细胞老化主要【yào】表现为【wéi】G1期阻滞，个别情况下也可伴随【suí】G2/M期周期阻滞，或直接【jiē】由G2/M期阻滞诱发形【xíng】成。

二、细胞形态改变

虽然由于细胞【bāo】周【zhōu】期【qī】的中断和DNA复【fù】制的停止，老化细胞内【nèi】的DNA含量【liàng】与正常细【xì】胞【bāo】类似，但 RNA与蛋白质丰度均【jun1】比正常细胞要明显升【shēng】高【gāo】。这是【shì】因为，尽【jìn】管细胞进入【rù】老【lǎo】化阶段后蛋【dàn】白质的整体合成速率降低，但【dàn】是蛋白质的降解体系受到更加明显【xiǎn】的抑制，导致蛋白质在【zài】细胞内【nèi】持续堆积。但，由于不同组织来【lái】源的细胞，其形态【tài】本就各不相同，因【yīn】此，目【mù】前还并无客观的、统一的标准从【cóng】细胞形态判断并定义老【lǎo】化细胞【bāo】。换句话说，目前并不能【néng】直接【jiē】根据细胞的形态【tài】去判【pàn】断是否老化【huà】细胞。

总结：

研究表明,衰老细胞的细胞核、细胞质和细胞膜等均有明显的变化：

①细胞内水分减少,体积变小,新陈代谢速度减慢；

②细胞内酶的活性降低；

③细胞内的色素会积累；

④细【xì】胞内呼吸速度减慢,细胞核体【tǐ】积增大,核膜内折,染色质【zhì】收【shōu】缩,颜色加深.线粒体数量减少【shǎo】,体【tǐ】积增大；

⑤细胞膜通透性功能改变,使物质运输功能降低.

如何防止细胞老化：

1. 不要等细胞长得太满才传【chuán】代【dài】。细胞【bāo】太密会导致【zhì】细胞状态下【xià】降，产生细胞接【jiē】触【chù】性抑制。

2. 细【xì】胞不要消化【huà】过度【dù】。采用医【yī】蛋白酶消化细胞，会造成细胞表【biǎo】面一定程度的细胞【bāo】损伤。

3. 最重要【yào】的是使【shǐ】用优质【zhì】的血清和培【péi】养基：干细胞对培养基中的【de】内毒素非常敏感。除了要留【liú】意【yì】基础培养基的内【nèi】毒素外，也【yě】要留意血清的内毒素。如果血清中内毒素≥3EU/ml时【shí】，干【gàn】细胞很【hěn】容易老【lǎo】化或死亡，导致细胞【bāo】“亚健康"状态【tài】，导致实验受【shòu】到影响。很多使用者，在血【xuè】清在试【shì】用前，就会通过【guò】提早【zǎo】审【shěn】核【hé】该【gāi】批次《检测报告》，以决定是否入围【wéi】进行试【shì】用。

4. 在开始【shǐ】养细胞并传代时，也要特别注意【yì】冻存细胞【bāo】，以【yǐ】保持【chí】细胞【bāo】有种【zhǒng】子库存在，可以有效避【bì】免细胞损伤。