为了保证ELISA试剂盒试验【yàn】的稳定【dìng】及顺利完成，下面【miàn】给大家讲解使【shǐ】用【yòng】洗板机洗【xǐ】板时应注意以下三个步【bù】骤。

1、洗涤参数

主要的参数是洗涤量【liàng】。自动洗板机会分配洗涤液。如果你【nǐ】之前遭遇过高【gāo】背景，那么不要犹豫，将洗涤量调为【wéi】高，比【bǐ】包被体【tǐ】积【jī】更高。太少的洗涤【dí】液会【huì】让一部分分【fèn】析【xī】表面【miàn】洗涤不到，从而明显增加背景。所有反【fǎn】应【yīng】孔的【de】洗涤量必须相【xiàng】同。

ELISA试剂盒的【de】使用手【shǒu】册中列出【chū】包被量。我们建【jiàn】议使【shǐ】用350µl洗【xǐ】涤液进行洗涤，以便清【qīng】洁整个反应孔的壁。一般来【lái】说【shuō】，洗涤量【liàng】越高，则孵育步骤残留【liú】的抗体或抗原量【liàng】就越少。

2、洗涤次数

影响洗涤效果【guǒ】的【de】主要参数【shù】是洗涤循环的量。当然，洗涤次数越多【duō】，背【bèi】景越低。然【rán】而，太【tài】多次【cì】的洗涤会降低信号强度，使其难以测定【dìng】。通【tōng】常【cháng】的做法是在每次抗体或抗原孵【fū】育后【hòu】重复【fù】洗涤三次。不过【guò】，一般而言，包被【bèi】平【píng】板需要的洗涤次数【shù】比用户包被的平板要少。对于【yú】用户包【bāo】被的ELISA板，必须优化洗涤次数。

控【kòng】制洗涤量和【hé】洗【xǐ】涤次数的另一种方法是【shì】加入过量的洗涤液。一般来【lái】说，96孔板【bǎn】的【de】每个孔能容纳【nà】330至460 µl。不过，有些自动化洗板机可【kě】设【shè】置程序，分配远远超出这个量的【de】洗涤液【yè】，比如1 ml。它是如何【hé】做【zuò】到的呢？其【qí】实很简【jiǎn】单，就【jiù】是在分【fèn】液的同时打【dǎ】开吸液【yè】功能。换句话说，随【suí】着分【fèn】液器分配更多的液体，抽【chōu】吸器也将液体吸出。这种技术能增【zēng】加洗涤量，但【dàn】不会【huì】溢出到其他孔中。

3、抽 吸

还有一些参数会影响洗涤步骤的效果【guǒ】。这些参数包括【kuò】吸【xī】液高度和吸【xī】入位【wèi】置，这两【liǎng】者【zhě】都能【néng】调整，以降低背景（残【cán】留量）和差异。

残留液体【tǐ】中包含未结合的抗原或抗【kàng】体，它们会增加背景信号。残【cán】留量越小，残留液体越【yuè】少【shǎo】，转【zhuǎn】移到下一步【bù】的【de】干扰液体【tǐ】也就越少【shǎo】。

吸液高度会明显影响残留量【liàng】；如果洗涤【dí】吸头与【yǔ】反【fǎn】应【yīng】孔底部的距离稍【shāo】大，那就会让残【cán】留量急剧增加。反【fǎn】之，如果洗涤吸头【tóu】压【yā】着反应孔底部【bù】，那么也【yě】会使吸液效率降低【dī】，残留量增加。

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