温育是ELISA测定【dìng】中影响【xiǎng】测【cè】定【dìng】成败最为【wéi】关键的【de】一个【gè】因【yīn】素。ELISA作为一种固相免【miǎn】疫【yì】测定，抗原【yuán】抗体的结合反【fǎn】应【yīng】在固【gù】相上进行，要使【shǐ】液相中的抗原或抗【kàng】体与固【gù】相上的特异抗体或抗原结合，必【bì】须在一定的温度条件下反应一定的时间。温【wēn】育所需时【shí】间与温度成反比【bǐ】，即温度越高，则所需时间【jiān】相对较短。最为常用的温育【yù】温度有【yǒu】37℃和室温，其次是43℃和【hé】2～8℃。

因此，关于温育，在实际测定操作中一定要注意以下几点：

1、要保证在设定的温度下有足够的反应时间。

一般来说，加【jiā】完样【yàng】本【běn】和/或反应试【shì】剂后【hòu】，将微孔【kǒng】板从【cóng】室温拿至【zhì】水浴箱【xiāng】或温【wēn】箱中【zhōng】时，孔内温度【dù】从室温升至37℃，需要【yào】一定的时间，尤其是在室温比较【jiào】低以及非【fēi】水浴的状【zhuàng】态下【xià】，这段升温时间【jiān】可能还比较长，而在临床实验室中【zhōng】，很【hěn】少有人注意这【zhè】个问题【tí】，通常是将微孔【kǒng】板一放入温箱即开始计时【shí】，这样就很容易造【zào】成【chéng】实【shí】际【jì】测定【dìng】中温育【yù】时间不【bú】够，弱【ruò】阳性样本测不出来的问题。曾有一地处【chù】南方的血站同行提出了一个【gè】问题，就【jiù】是【shì】在每一【yī】年的冬季总【zǒng】有那【nà】么一个【gè】多月的【de】时间【jiān】，在做HBsAg测定的【de】室【shì】内质控中，测定由卫生【shēng】部临床【chuáng】检验中【zhōng】心供应的1 ng/ml弱阳性样本时，总是测不出【chū】来【lái】，不知原因为【wéi】何？这可能就与南方冬天室内【nèi】温度较低有关，此时微孔板转入温【wēn】箱后37℃温育时间不够，以【yǐ】致【zhì】弱阳【yáng】性样本测定为阴性。因此，为【wéi】保证37℃下足够【gòu】的温育时间，临床实验室可自【zì】行确定本实验室不同季节（不同室温下）微孔板【bǎn】从室温拿至温箱后需【xū】要多长时间孔内温【wēn】度才【cái】能【néng】达【dá】到37℃，从而【ér】适【shì】当延长板条在温箱中的【de】放置时【shí】间。具体的做【zuò】法是，用一小温度计放置板孔反应溶【róng】液中测量观察即可。 

2、边缘效应"的排除。

以前【qián】在【zài】使【shǐ】用96孔【kǒng】板【bǎn】的ELISA测定中，常发现有【yǒu】“边【biān】缘效应"，即外【wài】周孔显色较中【zhōng】心孔深【shēn】，产生【shēng】这种“边缘效应【yīng】"的原因【yīn】可【kě】能【néng】为96孔板周孔【kǒng】与【yǔ】中心孔【kǒng】表【biǎo】面或热力学特征的不同。但【dàn】有研究【jiū】证实在温育中的【de】热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙【yǐ】烯本【běn】身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将【jiāng】板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一【yī】热力学梯度。因此使【shǐ】用水【shuǐ】浴或在将反应溶液加入至板【bǎn】孔中时，将板和溶液均【jun1】加【jiā】热至【zhì】温【wēn】育温度（如37℃），就可以很容【róng】易地排除“边缘【yuán】效应"，并且可【kě】提【tí】高测定的【de】重复性【xìng】。

总而言之，在临床ELISA测定中【zhōng】，要保【bǎo】证好【hǎo】的测定效果，可采用下述简单办法来确保温育条件，即尽量采用水【shuǐ】浴，温【wēn】育中让微【wēi】孔板浮于水面上，或【huò】将浸透水的沙布放【fàng】入【rù】一大饭盒中成【chéng】一湿盒，放于温箱中，这样就会因为【wéi】板条孔【kǒng】底部直接与【yǔ】37℃水【shuǐ】或【huò】湿布的【de】接【jiē】触【chù】，以及【jí】水浴箱或湿盒内的高温度【dù】，而使反应溶液的温度迅速与温【wēn】室平衡。