一、实验目的

植物细胞和【hé】组织培养的技术性强，要求无菌操作，通过本实验可【kě】初步掌握常规的【de】组织【zhī】培养技【jì】术，加深对【duì】无【wú】菌【jun1】操作的了【le】解。

二、实验原理

植物【wù】的性：植物体的任何一个细胞都具有【yǒu】生【shēng】长【zhǎng】分【fèn】化成为一个完整植株的【de】能【néng】力，称【chēng】为植物的性。

植【zhí】物组织培养就【jiù】是利用植物【wù】的【de】性进行离体无菌植【zhí】物培【péi】养的一【yī】门技术。植物组织培养【yǎng】按其原始意义，就是指愈【yù】伤组织【zhī】培养。但发展至今，其范围日益扩大【dà】，已包括植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体【tǐ】无菌培养。因此，拥有【yǒu】几种【zhǒng】不同水平的培【péi】养技术，即整体的、器官的【de】、组【zǔ】织【zhī】的、细胞【bāo】的和原生【shēng】质的培养技【jì】术。

本实验选择豌豆为材料，豌豆(Pisumsativum)属【shǔ】豆科【kē】植物，是粮食、饲料和重要的【de】蔬菜【cài】作物，也是遗传学家和植物生【shēng】理【lǐ】学家感兴趣和乐于采用的实验植【zhí】物【wù】，豌豆的根、茎、子叶、下胚轴【zhóu】、上胚轴、花芽等外植体，皆可形成愈伤组织，其中茎【jīng】尖、幼胚、幼叶等器官可【kě】成功的再生【shēng】成植【zhí】株。茎【jīng】尖【jiān】培【péi】养可包括【kuò】小至十几微米【mǐ】的茎尖分【fèn】生组织(生长点【diǎn】)和大至【zhì】几十毫【háo】米的茎尖或更【gèng】大的【de】芽培养。在实践应用上【shàng】，常采【cǎi】用生长点的【de】培养使患病植物去病毒，以达到挽救优良品种【zhǒng】，提高产量【liàng】和质量之目的。

三、实验材料

仪器设备：

1. 酒精灯、三角烧瓶，培养皿。

2. 镊子、剪刀、剖针。

3. 双筒解剖显微镜。

4. 光照培养箱或温室。

5. 材料烟草无菌苗、豌豆幼苗。

试剂：

1. MS培养基，植物激素：NAA、6-BA等。

2. 饱和漂液(次氯酸钠)。

3. 70%酒精、100%酒精、酒精棉球。

4. 无菌水。

四、实验步骤

豌豆苗的茎尖培养：

1、取发芽6天的豌豆【dòu】幼苗10株，简取1厘【lí】米左【zuǒ】右的茎尖，浸入70%的酒精中1分钟，再【zài】浸【jìn】入饱和【hé】次氯酸钠溶【róng】液中消毒15分【fèn】钟，(此步以后要【yào】求无菌)用无【wú】菌水【shuǐ】中冲洗5次，在灭菌【jun1】的滤纸上吸干【gàn】水分，放入【rù】灭【miè】菌的【de】培养皿中。

2、在双目【mù】解剖镜下，用灭菌的解剖【pōu】针剥【bāo】去幼【yòu】叶露出生长锥，用灭菌的解剖针挑取带着【zhe】两至三【sān】个叶原【yuán】基的【de】生长锥【zhuī】。

3、将挑好的【de】茎尖【jiān】移到MS+10.7μmol/L萘乙酸【suān】(NAA)+4.4μmol/L6-苄基腺嘌呤【lìng】(6-BA)的培养基上【shàng】诱导【dǎo】愈伤组织形成，用封口膜【mó】将培养皿【mǐn】封好。

4、在【zài】恒温【wēn】培养【yǎng】箱中，26℃下,培养六周，形成愈伤【shāng】组织，经继代后，可用于生根【gēn】培养。