你【nǐ】们细【xì】胞是怎么冻存的?求【qiú】解!!!我【wǒ】的是4度冰箱放半【bàn】小时,-20度冰箱【xiāng】半小【xiǎo】时【shí】,然后转移到-80度冰箱!但是放在-80度冰【bīng】箱1个【gè】月【yuè】后,细胞复苏就感【gǎn】觉状态不太【tài】好了!!

做实验前要先学【xué】会冻存，以备【bèi】自己在后面的实验【yàn】中能保持同一来源、稳定可【kě】靠的细胞【bāo】，且【qiě】可减少污染或其【qí】它不【bú】利影响。

影响冻存细胞活性的因素

1、细【xì】胞冻存【cún】保护剂：常用的有【yǒu】二甲基【jī】亚【yà】砜（DMSO）和甘油【yóu】，常用【yòng】的浓度为5%-10%（90%小牛血清）。DMSO对【duì】二倍体细胞【bāo】的毒性较甘油小。

2、细胞悬液的【de】冻结【jié】速度：慢冻时【shí】冰冻在【zài】细胞外【wài】形【xíng】成，因此【cǐ】不【bú】致损害细胞。多数细【xì】胞以每分【fèn】钟下降1℃的速度【dù】，降至-20℃冻结。均可获得满意效果。

3、保存温度：液【yè】氮【dàn】罐，可达到-196℃，此时【shí】所有的物理化学活动均【jun1】降至zui低【dī】限度，以保证细胞【bāo】长期保存。

4、复苏：急【jí】速融化复苏【sū】可防止损害细胞。冻结细胞从【cóng】液【yè】氮【dàn】中取出后，应立即放入37℃~43℃的水浴中，30秒【miǎo】至一分钟【zhōng】内融【róng】化。