很多试剂检查都涉及【jí】到规范曲【qǔ】线的疑问，ELISA试剂【jì】盒规范曲线做的【de】好与坏【huài】会【huì】直接【jiē】影响到试验的成果，乃【nǎi】至关系到试验的成败，那么究【jiū】竟怎么绘【huì】制或规【guī】范曲线【xiàn】呢？

一、做规范曲线样品检查时有几个疑问需要注意

1、样品【pǐn】的浓度等目【mù】标是依据规范曲线【xiàn】计【jì】算出【chū】来的，所【suǒ】以首先要把做规范曲【qǔ】线【xiàn】看作是比做正式试验还【hái】要主要的一件事，不然后边【biān】的试验成果【guǒ】无从谈起【qǐ】。

2、设【shè】置规范曲【qǔ】线【xiàn】样品的规范【fàn】浓度规模要有【yǒu】一个对比大的跨度【dù】，而【ér】且【qiě】要能包括【kuò】你所要检查【chá】试验样品的浓度，即样品的【de】浓度要在规范【fàn】曲线浓度规模以【yǐ】内【nèi】，人ELISA试剂盒【hé】包括上限和下限。而对于呈S型的规【guī】范【fàn】曲线，尽量要使试验样品【pǐn】的浓度【dù】在中【zhōng】心斜【xié】度陡段，即【jí】曲线简直成直线的【de】规模内。

3、选用倍比稀释法规范曲线中的规范【fàn】样品浓【nóng】度，这么就能够确【què】保规范样品【pǐn】的【de】浓度不会【huì】出现较【jiào】大的违【wéi】背。

4、检查规【guī】范样品时，应按浓度【dù】递加【jiā】顺序进行，以削减高浓度【dù】对低【dī】浓度的影响【xiǎng】。

5、规范曲线的样品数通常为7个点，但少要确保有5个点。

6、做出的规范曲线相【xiàng】数因试验要【yào】求不一样而【ér】有所变化，但【dàn】通常来说，相数R少要大于【yú】0.98，对于【yú】有些试【shì】验，少要0.99乃【nǎi】至是0.999.

二、ELISA试剂盒挑选啥方程去拟合

在S曲线的低浓度部分能够用乘幂方程的拟【nǐ】合，中低浓度部分能够用【yòng】直线方程，中心部分可用对数方【fāng】程，而中后段可用四参数【shù】。免疫检查时标准点（能【néng】够【gòu】是【shì】倍比【bǐ】稀释的【de】，也能够【gòu】不【bú】是【shì】）浓度假【jiǎ】设和相应的吸光度（OD）值假【jiǎ】设能够出现直线【xiàn】当【dāng】然是抱负【fù】的了，这时【shí】能【néng】够经过EXELL等利便的取得拟合【hé】曲线【xiàn】，进而【ér】推【tuī】算出样品的浓度值。 

对于【yú】标准曲线的拟合办法【fǎ】，直线、二次曲线、三次曲线、指【zhǐ】数【shù】、对数【shù】等虽都可用于ELISA及其它生物学【xué】反响中【zhōng】的曲线拟合，但都只合用于曲线的一部【bù】分，有的合用于前半【bàn】段【duàn】，有的合用于【yú】后半段，有的合用于中心一【yī】段【duàn】，而【ér】Logistic曲线【xiàn】则对【duì】曲线的【de】悉数都有较好的合用性【xìng】。在一个长的区间内，Logistic应当都能【néng】拟合【hé】得较为【wéi】抱负。假设用来定量，S形【xíng】曲线【xiàn】的中心段（较陡处）是【shì】对比好【hǎo】的，而【ér】两真个【gè】平整【zhěng】部分计算误差会【huì】大，有时乃至会很大。用于【yú】免疫检查【chá】的所谓【wèi】“标准曲【qǔ】线"真【zhēn】实称【chēng】为【wéi】拟合曲线对比【bǐ】适宜。现在国际上盛行的免疫检查拟合【hé】办法是“四参数【shù】逻【luó】辑拟合"，用这【zhè】种拟合办法通【tōng】常能够【gòu】对比的反映浓度【dù】和吸光【guāng】度的【de】曲【qǔ】线，从而【ér】进一【yī】步对比的【de】取得样品中待测物【wù】质的浓度值【zhí】。但咱们做免疫【yì】检查很少有时【shí】候能【néng】够有这【zhè】么抱负的情况，标品浓度和相应OD值通常是"S"型的曲线，这时【shí】就不能用【yòng】直线拟合的办法了，而【ér】对拟【nǐ】合办法进行挑选即是必要的了。

枢【shū】纽在于你【nǐ】的标准曲线做到了S形的哪一部分，你想检查的样品浓度在曲线的哪一【yī】部分。当然，假设用于【yú】定量，仍是在中心一段较好。但建【jiàn】模【mó】型【xíng】是一回事【shì】，而用它来定量是另【lìng】一回【huí】事。这些【xiē】办【bàn】法【fǎ】当然没有【yǒu】一种办法能够通用，但也都能够【gòu】用。但并不是说它【tā】即是的。事实上不仅【jǐn】是【shì】ELISA，其它良多【duō】生物学【xué】反响【xiǎng】都是【shì】S形曲线【xiàn】，也都能够用【yòng】Logistic曲线拟合。

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