ELISA试剂盒实验的原理在我【wǒ】们平时看【kàn】来【lái】觉得很简单，无非【fēi】就是【shì】固定抗原，添加【jiā】一抗、二抗和底【dǐ】物【wù】，间中夹杂着洗【xǐ】涤和闭。然【rán】而，即使是【shì】平常的洗【xǐ】涤和封闭，如果【guǒ】做得【dé】不太好，也有可能影【yǐng】响整个实验。在做完实【shí】验时，我们是否能获得有用的信【xìn】息，这在【zài】很大程度上取决【jué】于结果的信噪比。背【bèi】景噪音会直接关系【xì】到结果的判断。那【nà】么怎样才能降低ELISA试剂【jì】盒【hé】实【shí】验中的【de】背景【jǐng】因素呢，今【jīn】天我们一起【qǐ】来了解。
 

       洗涤很重要【yào】

 

　　洗涤步骤看似很无聊，其实很重【chóng】要，因为如果未结【jié】合的【de】材【cái】料【liào】(如非特异结合的【de】抗体或检测试【shì】剂【jì】)残留【liú】在微孔板中【zhōng】，那么它【tā】会增加【jiā】背景【jǐng】噪音。如有必要，可增加洗涤液中的盐浓度，这【zhè】会阻止非【fēi】特异结合【hé】反【fǎn】应。如果背景过【guò】高【gāo】，而您怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。
 

　　封闭更关键
 

　　封闭液【yè】的【de】作用是让不相【xiàng】关的蛋白占据【jù】微孔板【bǎn】中【zhōng】潜在的结合【hé】位点。这就降低了【le】可产生信号的抗体非特异结合的机【jī】会【huì】。您当然【rán】也希望抗【kàng】体只与目【mù】的蛋白【bái】结合吧。如【rú】果您【nín】的背【bèi】景过高，怀疑封闭不【bú】充分，那么您可以尝试使【shǐ】用更高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间【jiān】。如果您一直被【bèi】背景【jǐng】问题所困扰，那么也许【xǔ】您该花些时【shí】间来【lái】优化封闭液【yè】。这可【kě】能需要【yào】时间，但也是值得的。目前【qián】主【zhǔ】要有【yǒu】两种【zhǒng】类型的封闭【bì】液：蛋【dàn】白和非离子【zǐ】型【xíng】去污【wū】剂。您使用的类型须取决【jué】于多【duō】个因素，包括微孔板的表【biǎo】面试剂、吸附的抗原、您的抗体和检测【cè】试剂。好【hǎo】的【de】封【fēng】闭液应降低【dī】非特异性结合，但【dàn】它不应当与抗【kàng】原、抗体【tǐ】或检【jiǎn】测【cè】试剂发生相互【hù】作【zuò】用【yòng】。zui常用的非【fēi】离【lí】子【zǐ】型【xíng】去【qù】污剂【jì】是Tween-20。这种封【fēng】闭液便宜、稳【wěn】定，在去【qù】除洗涤过程【chéng】中的一【yī】些【xiē】非特异结合上很有用。但【dàn】它们【men】只在存在时起作【zuò】用，因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度(正常浓度为0.9-22.1%)，它【tā】会降低特异【yì】结合，产【chǎn】生假阴性。另一个选择是使用蛋白【bái】和【hé】非离子型去污剂【jì】这两种封闭液，后【hòu】者可协助洗涤过程中的封闭。蛋白封闭液则有所不同。它们与开放【fàng】位点结合并封闭，同时稳定与微孔板结合的【de】抗原分子。常用的蛋白封【fēng】闭液包括牛血清【qīng】白蛋白(BSA)、脱脂奶粉、正常血清和【hé】鱼明胶。
 

　　抗体浓度须优化
 

　　如果试【shì】剂稍有不同，则可【kě】能需要优化抗体【tǐ】的【de】量。记住，非特异的抗体结合会增加背【bèi】景。为了防【fáng】止这一点，切【qiē】勿使【shǐ】用过【guò】多的一【yī】抗或二抗。
 

　　检测试剂要适量
 

　　另一点也【yě】很显而易【yì】见：切勿使【shǐ】用过多的检【jiǎn】测【cè】试剂【jì】。如【rú】果浓度【dù】过高，或者未正确稀释，则会【huì】导致高背景。也不要【yào】显色过度【dù】，如有必【bì】要，优化【huà】一下何时应加入终止液。
 

　　相信在注意这些细节后，我们就可以降低ELISA试剂盒实验中背景因素，才可以获得我们想要的结果信息。