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细胞培养基的操作过程 你了解吗
更【gèng】新时【shí】间:2024-9-22   点击次数:1355次【cì】

细胞培养基是人工模拟细胞【bāo】在体内【nèi】成长的养分环境【jìng】,是供应细【xì】胞养分和促【cù】进细胞【bāo】成长增殖【zhí】的【de】物质基础【chǔ】。培育液或培育基的含义简直相同【tóng】,英文都【dōu】是【shì】medium。当它是粉剂时,倾【qīng】向性地称为培【péi】育基,而将粉剂配成液体后,多称【chēng】为培育液。培育液中常常补【bǔ】加血清【qīng】、抗生素等成分。
 过程:
一、复苏
1.把冻存【cún】管从【cóng】液【yè】氮中取【qǔ】出来,当即投入【rù】37℃水浴锅中,轻【qīng】微摇晃。液体都融化后(大约9-22.5分钟),拿出来喷点酒精放到【dào】超【chāo】净工作台里【lǐ】。
2.把上述细胞悬【xuán】液吸到装10ml培育【yù】基的【de】15ml的离心管中(用培育基【jī】把【bǎ】冻【dòng】存管洗【xǐ】一遍【biàn】,把【bǎ】粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。
3.把上清液【yè】倒【dǎo】掉,加1ml培育【yù】基把细胞悬浮【fú】起来。吸到装【zhuāng】有10ml培育基的10cm培育皿中前后左右轻轻摇晃,使培【péi】育【yù】皿中的细【xì】胞【bāo】均匀【yún】分布。
4.标好细胞品种【zhǒng】和日【rì】期、培育【yù】人姓名【míng】等,放到CO2培育箱【xiāng】中培育【yù】,细胞贴壁后【hòu】换培育基。
5.3天换一次培育基。

 二、传代
1.培育皿中的细胞覆盖率到达80%-90%时要传代。
2.把原有培育基吸掉。
3.加恰当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化9-22分钟。
4.细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培育基终止消化。
5.用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来。
6.把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟。
7.倒掉上清液,加1-2ml培育基,把细胞都吹起来。
8.依据细胞品种【zhǒng】把【bǎ】细胞传到【dào】几个培育皿中。一般【bān】,癌细胞【bāo】分5个,正常细胞传3个,继续【xù】培育【yù】。
 三、冻存
 把细胞消化下来【lái】并离心【xīn】(同上)。用配好的冻存液把【bǎ】细【xì】胞悬浮【fú】起来,分装到灭菌的冻存【cún】管中,中止几分【fèn】钟,写【xiě】明细胞【bāo】品种,冻存日期4℃30min,-20℃30min,-80℃过夜,然后放到液【yè】氮【dàn】灌中保存。

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