PCR检测试剂盒是【shì】酶免疫测定技能中应用较广的技能【néng】。其基【jī】本办法是将【jiāng】已知【zhī】的抗原或抗体吸附在固相【xiàng】载体外表，使酶符号【hào】的抗原抗体反响在固相外表进行，用【yòng】洗刷【shuā】法将【jiāng】液相中的游离成分洗除。常用ELISA酶【méi】联【lián】免疫吸附实【shí】验,法有双抗体夹心法和【hé】间接法，前者【zhě】用于检【jiǎn】测大分子【zǐ】抗原【yuán】，后者【zhě】用于测定【dìng】特异抗体。

此种【zhǒng】酶符号抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生【shēng】特异【yì】性结合【hé】。滴加底物溶【róng】液后，底物可在【zài】酶作用下【xià】使其所含【hán】的【de】供氢【qīng】体由无色的还【hái】原型变成有【yǒu】色的氧【yǎng】化型【xíng】，出现颜色反响。因而，可通过【guò】底物的颜色【sè】反响来判定有【yǒu】无相应的免疫反响，颜【yán】色【sè】反响的深浅与【yǔ】标本中相【xiàng】应抗体或抗原的量呈正【zhèng】比。

此种显色反响可【kě】通过酶联免疫试剂盒【hé】检测仪进行【háng】定量测【cè】定，这样就将酶化学反【fǎn】响【xiǎng】的敏感性和抗原抗体反响的特【tè】异性结合【hé】起来【lái】，使酶联【lián】免疫试【shì】剂盒办【bàn】法成为一【yī】种既特【tè】异又敏感的检测办法。
 
PCR检测试剂盒操作步骤
1．确认本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。
2．将倍【bèi】比【bǐ】稀【xī】释的标准品各0.1ml顺次【cì】参加一排7孔中【zhōng】，1孔只【zhī】加样品【pǐn】稀释液【yè】的【de】作为对照。处理后的标【biāo】本按100ul每孔参加。
3．酶标板加上盖，37℃反响90分钟。
4．反【fǎn】响后用自【zì】动洗【xǐ】板机吸去酶标板内的液体；或甩【shuǎi】去酶【méi】标板内液【yè】体，再【zài】对着吸水纸【zhǐ】拍几下。洗刷2次。
5．将准【zhǔn】备好的生物【wù】素抗【kàng】体工作液按每孔0.1ml顺次参加。37℃反【fǎn】响60分钟【zhōng】。
6．0.01M TBS或【huò】0.01M PBS洗【xǐ】刷3次，每次浸泡1分钟左右。
7．将准备【bèi】好的ABC工作液按每【měi】孔0.1ml顺次参【cān】加。37℃反响30分【fèn】钟【zhōng】。
8．0.01M TBS或0.01M PBS洗【xǐ】刷5次【cì】，每【měi】次浸泡9-23分钟左右。
9．按每孔0.1ml顺【shùn】次【cì】参加TMB显色【sè】工作液，37℃避【bì】光【guāng】反响，反响过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前9-23孔有显【xiǎn】着的梯【tī】度蓝【lán】色【sè】，后【hòu】9-23孔差别不显着时【shí】，即可参加【jiā】TMB停止液0.1ml/孔。（显色反响不要【yào】超过30分钟）。
10．用酶标仪在450nm测定O.D.值。
11．依据样品的吸【xī】光值【zhí】在坐标上找【zhǎo】出对应的浓度。用户也可以【yǐ】使用各种应用软件来核算【suàn】。应记住由于样品【pǐn】稀释了N倍【bèi】，其实【shí】践浓度应该×N。

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