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操作细胞铺板实验技巧
更新时【shí】间:2024-9-23   点【diǎn】击次数:1585次【cì】

细胞生物学试验,细胞铺【pù】板大概是常见的一个试验。但【dàn】是有很多【duō】人不是很【hěn】得办法,铺得【dé】不是很均匀:要【yào】么【me】中心【xīn】密周围【wéi】稀,要么周围密中心秃【tū】顶。怎【zěn】么办【bàn】呢?以【yǐ】下来自技能人员详细【xì】解析,请收好了!

 


一般96孔板,每孔是加100微升细胞悬液,从【cóng】孔的左边靠近【jìn】底部加入,加完半边板后,将【jiāng】未加【jiā】的细胞悬【xuán】液混【hún】一下再继续加剩下的半边板【bǎn】子,都加完后盖上盖子,左手悄悄扶【fú】住板的左边,右【yòu】手【shǒu】悄悄敲击板【bǎn】的【de】右边缘,留意掌【zhǎng】握力【lì】度【dù】(我一般轻巧敲三下【xià】),太强或次数太多会导致细胞会【huì】集成堆,将【jiāng】板【bǎn】顺【shùn】时【shí】针旋【xuán】转(逆时针【zhēn】作用不好),顺次敲击剩下【xià】三【sān】个边【biān】,静置约【yuē】5分钟,放入37度培育箱。

6孔板、12孔板或24孔板,均【jun1】可采用将个【gè】孔加入【rù】少【shǎo】量无血清【qīng】培育【yù】基【jī】,晃动滋【zī】润【rùn】整个【gè】孔底,然后用【yòng】移液枪【qiāng】吸至第二孔,同样办法滋【zī】润孔底,其它【tā】孔一次类【lèi】推,这样整个孔【kǒng】底都是湿润【rùn】的,细胞悬液会【huì】平【píng】铺在整个孔底,加细胞悬【xuán】液的时候能够防止加在中心【xīn】,中心细胞多,而加在周边晃匀后【hòu】会出现周边细胞多【duō】中心少的现象,细胞涣散较均匀,留意加【jiā】完细胞悬【xuán】液后要放工【gōng】作台【tái】静置一下。

细胞悬液【yè】加【jiā】完后,将细胞培育板举【jǔ】高,对【duì】着灯【dēng】光,从底部往上看,看【kàn】细【xì】胞【bāo】有没有【yǒu】抱【bào】团。然后【hòu】从底部敲击,使之涣散【sàn】。假如试验室有平板【bǎn】振动器的话,建议用这个仪器稍振动一下【xià】,作用不错,振幅小,频率高。

细胞要尽量打散,大【dà】部分呈【chéng】单个状态。离心后,要充沛悬浮【fú】。还有【yǒu】转移到【dào】六孔【kǒng】板后,需求晃动【dòng】,晃的时【shí】候不要让细【xì】胞液转圈,不然【rán】细胞就全被【bèi】带到中心去了,就会【huì】不均匀。
  
一瓶细胞长满后,正常处理【lǐ】,在【zài】培育瓶里【lǐ】吹匀,然后铺6孔板,每孔2毫升,铺完之后不必调查直接用酒【jiǔ】精【jīng】棉擦拭,然后放【fàng】到培育箱【xiāng】里,轻【qīng】微的左右前后各【gè】三圈。基本上24小时之后再【zài】调查,每【měi】孔【kǒng】的【de】细胞【bāo】都会很均【jun1】匀。

计算【suàn】好【hǎo】所【suǒ】需【xū】求的悉数【shù】液体量和细【xì】胞量,混【hún】匀后,加到六孔板里,六孔板按横8字型晃【huǎng】,显微镜下调查,假如不均匀,按上述【shù】办法再晃。假如细胞未【wèi】计数直接种的话【huà】,在种六孔板【bǎn】的【de】过程中【zhōng】,随【suí】时晃一下混匀用【yòng】的瓶子。 

放【fàng】在水【shuǐ】平板面上先上下移动【dòng】,再左【zuǒ】右移动【dòng】,每【měi】个方向5到6次,但要【yào】害的是摇晃后【hòu】直接【jiē】放入培育箱中,不要再做过多的【de】运动,例【lì】如放【fàng】到镜下去看,不然很【hěn】容易就又聚到中心去了。

以上呢,就是如何把细胞铺板铺均【jun1】匀【yún】的办法,以上【shàng】技能【néng】文献仅供【gòng】参考,如【rú】您还【hái】有疑问您可来自【zì】咨询【xún】我【wǒ】司技能专员【yuán】,为您答疑解【jiě】难!本司是一家出产和销售科学用试剂产品,范畴包括化学【xué】、分析化学、生命【mìng】科学和【hé】材料科学等根【gēn】底【dǐ】创新范【fàn】畴,助力客户【hù】的研讨方案【àn】,在【zài】广大用【yòng】户的协助【zhù】和支持【chí】下【xià】,经过【guò】不懈的努力【lì】,以过硬的【de】产品质量和洽的服务态度【dù】,为客户提供一个安稳平台,成【chéng】为客户可信赖【lài】的长期合【hé】作伙伴。

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