1、血清

A、DNA-阳【yáng】离子脂【zhī】质体复合【hé】物构成【chéng】时不能含【hán】血清，由于血清会影响复合物的构【gòu】成。

B、一般细胞对无血清【qīng】培【péi】养能【néng】够耐受几个小时没问题，转染用的【de】培养液【yè】能够含血清也能够不加【jiā】，但【dàn】血清一度【dù】曾【céng】被以为会降低转染效率，转染培养【yǎng】基中【zhōng】参加血清需求【qiú】对条件进行优化【huà】。

C、关于对血清缺乏比较敏感的【de】细胞，能够运用养分【fèn】丰【fēng】厚的无血清培养基【jī】，或许在转【zhuǎn】染培养基中运用血清【qīng】。对血清缺乏比较敏感【gǎn】的贴壁细【xì】胞，建议运用转染试剂。有条件的【de】话，能【néng】够用无血清培养基代【dài】替PBS洗细胞两遍，注意洗的时分要轻【qīng】，靠【kào】边【biān】际缓缓参【cān】加液体，然后不要吹吸细【xì】胞，而是【shì】滚动培养板让液体滚动在【zài】细胞表面【miàn】。假如洗【xǐ】的【de】太厉害【hài】，细胞又损失一部分【fèn】，加了脂【zhī】质体后，细胞【bāo】受影【yǐng】响就更大【dà】了【le】，死亡细胞会增多【duō】。

2、抗生素(PS)

抗生素，比如青霉素和链【liàn】霉素，是影响【xiǎng】转【zhuǎn】染【rǎn】的培养基添加物。这些抗生素一般【bān】关【guān】于真【zhēn】核细【xì】胞无毒，但阳离子脂【zhī】质体试剂【jì】增【zēng】加了细胞的通透性【xìng】，使【shǐ】抗生素能够【gòu】进入细胞。这【zhè】降低了细胞的活性，导致转染效率低【dī】。所以，在转染培养基中不能运用抗【kàng】生素，甚至在预备转染前进行细胞【bāo】铺板时也要【yào】防【fáng】止运用抗生【shēng】素。这样，在转【zhuǎn】染前也【yě】不用润洗细胞。关于稳定转【zhuǎn】染，不【bú】要在选择性培养基中运用【yòng】青霉素【sù】和链霉素，ICIN选择性抗生素的竞争性抑制【zhì】剂【jì】。另外，为了保【bǎo】证无血清培养基中细胞【bāo】的健康成长【zhǎng】，运用【yòng】比含血清【qīng】培养基更少【shǎo】的抗生【shēng】素量。

3、细胞状况

这点非常【cháng】重【chóng】要，不要急于求【qiú】成，必定要让细胞处于jia的成长状【zhuàng】况再做。有文献说传代不要超越17代。细【xì】胞复苏【sū】后的3代左右时细【xì】胞状况hao，不要用传了【le】许多代的细胞去做，细胞【bāo】的形【xíng】态都会发生改【gǎi】变【biàn】。大多数【shù】已建立的细【xì】胞系都是非整倍【bèi】体，原代培养包含【hán】了表达不【bú】同基因组【zǔ】合的细【xì】胞的混合物。细胞培养在试验室中保【bǎo】存数月【yuè】和【hé】数年后【hòu】会经历突变，总染色体重组【zǔ】或基因【yīn】调控改【gǎi】变【biàn】等而【ér】演化。这会导致和转染相关的细胞行为的改【gǎi】变【biàn】。假如随时刻发【fā】现这种改变，消融一【yī】管新鲜的细胞可【kě】能【néng】会恢复原先的转染活【huó】性。

4、细胞铺板密度

用于【yú】转染的jia细【xì】胞【bāo】密度【dù】根据不【bú】同的细胞类型或使用【yòng】而异【yì】。因转染试剂对细【xì】胞有毒【dú】害效【xiào】果【guǒ】，细胞太少，容易死。一般转【zhuǎn】染【rǎn】时【shí】，贴壁细胞密度为【wéi】70%-90%，悬浮细胞密度为9-23×106细胞/ml，确【què】保转染时细胞没有长满或处于静止期。由于转染效率对细【xì】胞密度很【hěn】敏感【gǎn】，所以在【zài】不同试验间坚持一个根【gēn】本的传代【dài】步【bù】骤很重要。

5.启动子的选择

取得高转染活性所【suǒ】需选择的启动子依赖【lài】于选用的细胞系和【hé】要【yào】表达【dá】的蛋白。CMV启【qǐ】动子在大多数细胞类型中能够取【qǔ】得高表达活【huó】性。同其他启动子，如SV40和RSV(劳【láo】斯【sī】肉瘤病【bìng】毒)相比，在BHK-21中其活性高。这三种病毒启动子在【zài】T细胞来历【lì】的【de】细胞系，如Jurkat中【zhōng】组成表【biǎo】达水平【píng】较【jiào】低。

6、DNA量

高质量的DNA关于【yú】进行【háng】的转【zhuǎn】染至【zhì】关重要。转染的质粒【lì】必【bì】定纯度好、浓度高、无内毒素。浓度不要低【dī】于【yú】0.35ug/ul。产物表达，48小时mRNA表达【dá】gao；72h蛋白表达gao。