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本周焦点 ELISA试验操作失利的主要原因
更新时间:2024-9-23   点击次数【shù】:1057次

我们知道,ELISA测定中影【yǐng】响要【yào】素【sù】较多,而【ér】且其操作中有一定的技术要求,在检【jiǎn】验中【zhōng】除正常反响外,有【yǒu】时常【cháng】可见到【dào】一些错误结果(即假阳性或假阴性),那么致使试验不成【chéng】功【gōng】的主要【yào】原因【yīn】有哪些【xiē】咧?

   
,标本的【de】影【yǐng】响:溶血标【biāo】本及混有红细胞的【de】血清选【xuǎn】用ELISA法检测易发【fā】生假【jiǎ】阳性。或许是【shì】溶血血清中含【hán】有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白中的【de】亚铁血红素),在洗【xǐ】刷过程中往往难以*洗【xǐ】脱,它可使H2O2释放出原【yuán】生态氧(O),从而【ér】催化【huà】底物四甲基【jī】联苯【běn】胺可溶性的【de】有色物质【zhì】,即【jí】显蓝色,发【fā】生假阳性。所以【yǐ】严重溶血【xuè】标本禁用。
   
第【dì】二,标【biāo】本受细菌【jun1】污染:因【yīn】菌【jun1】体中或许含有【yǒu】内源性辣【là】根过氧化物酶,因而,被【bèi】细菌污染的标本同溶【róng】血标本一样【yàng】,亦可【kě】发生非特异性显色而搅扰测定结果。
   
第三,标本保存不【bú】妥:在冰箱中保存过久的标【biāo】本,在间接法ELISA测定【dìng】中会【huì】导致本底过深、构成假阳性【xìng】;为克服上述搅扰,ELISA试剂【jì】盒【hé】测定的血【xuè】清标本宜为新鲜收【shōu】集;如不能当【dāng】即测定,5d内测定的血清标本可存放于【yú】4℃,1周后测定的血清【qīng】标本应低温【wēn】冻存;冻存后融解【jiě】的【de】标本,蛋白质局部浓【nóng】缩,分【fèn】布不均,应【yīng】充分混【hún】合【hé】后再测定,但混匀时【shí】应轻柔,不行激烈振动【dòng】。
   
第四【sì】,标本【běn】凝结不全【quán】:在工【gōng】作中,有时为了争取时间快速检测【cè】,常在【zài】血【xuè】液还未开始凝结时即强行离心别离血【xuè】清,使血清中仍残留部分纤【xiān】维蛋白原【yuán】,在【zài】ELISA测定过程中能【néng】够构成【chéng】肉眼可见的纤维蛋白块,易【yì】构成【chéng】假【jiǎ】阳性结果【guǒ】;因而【ér】血【xuè】液标本收集后有必【bì】要使其充分凝结后再别离血清【qīng】。

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