（一） 显色

显色【sè】是ELISA中【zhōng】的后一步温育【yù】反【fǎn】应，此时酶催化无色的底物【wù】有【yǒu】色的【de】产物。反应的温度和时间仍是影【yǐng】响显色的因素。在一定时间内，阴【yīn】性孔【kǒng】可【kě】保【bǎo】持无色，而阳性【xìng】孔则随时间【jiān】的延长而呈色加强。

适【shì】当【dāng】提【tí】高温度有助于加【jiā】速【sù】显色【sè】进行【háng】。在定量测【cè】定中，加入【rù】底【dǐ】物后的【de】反应【yīng】温度和时间应按规定【dìng】力求准确。定性测定的显色可在室【shì】温进行，时【shí】间一般不需要严格控制【zhì】，有时【shí】可根据阳性对照孔和阴性对【duì】照孔的显se情况适当缩短或延长反应时间，及时判【pàn】断。

OPD底物【wù】显色一般在室外温或37℃反应9-23分钟后即不【bú】再加深【shēn】，再延长反【fǎn】应时间，可使本底值增高。OPD底物液【yè】受光照会【huì】自行变色【sè】，显色【sè】反应应避光进行，显色反应结束时加【jiā】入【rù】终止液终止反应【yīng】。OPD产【chǎn】物用硫酸【suān】终止后，显色由【yóu】橙转向棕。

TMB受光照的影【yǐng】响【xiǎng】不大【dà】，可在室【shì】温中置【zhì】于【yú】操作台上，边反【fǎn】应观【guān】察结果。但为保证实验结果的稳定性，宜在【zài】规定的适【shì】当时间阅读结果。TMB经HRP作用后，约40分钟显色达，随即逐渐【jiàn】减【jiǎn】弱【ruò】，至2小【xiǎo】时后即可*消退至【zhì】无色。

TMB的终止液有多种，叠氮钠和十二烷【wán】基硫酸钠（SDS）等【děng】酶【méi】抑【yì】制剂均【jun1】可使【shǐ】反应【yīng】终止。这类终止剂【jì】尚能使蓝色维持较【jiào】长时间（9-23小时）不褪，是【shì】目视【shì】判断的良好【hǎo】终止剂。此外，各类酸性终止液则会使蓝色转变成，此时可用特定的【de】波长（450nm）测【cè】读吸光值。

（二）比色

比色前应先【xiān】用洁净的吸水纸【zhǐ】拭干板底【dǐ】附着的液体【tǐ】，然后将板【bǎn】正确放【fàng】入酶标比【bǐ】色仪的【de】比色架中。以软板为载体的试验，需先将板【bǎn】置于标准96孔的【de】座架中【zhōng】，才可进【jìn】行比【bǐ】色。

在加底【dǐ】物液显【xiǎn】色前，先将软板边缘剪净，这样，此板就可*平妥坐入【rù】座架中【zhōng】。 比色时应【yīng】先【xiān】以蒸【zhēng】馏水校零点【diǎn】，测读底物【wù】孔（未【wèi】经任何反应仅加底物液【yè】的孔）和空白孔（以生【shēng】理盐水或稀释液代替标【biāo】本作全过程【chéng】的孔），以记录本【běn】次试验的试【shì】剂状况。

其【qí】后可用空【kōng】白孔以蒸【zhēng】馏水校零点，以【yǐ】上各【gè】孔的【de】吸【xī】光度需减去空白孔的吸光度，然后进【jìn】行计算。

比色结果的表达以往【wǎng】通【tōng】用【yòng】光密【mì】度（oplical density，OD），现按规定用吸光度【dù】（absorbence，A），两者含义相同【tóng】。通常【cháng】的表示方法是，将吸收波长写于【yú】A字母【mǔ】的右下角，如OPD的吸收【shōu】波长为【wéi】492nm，表示方法为"A492nm"或"OD492nm"。