实时荧光定量PCR(RealTime PCR)技术服务

实时荧光定【dìng】量PCR技术即是在PCR反【fǎn】应体系【xì】中加入荧光【guāng】基团【tuán】，利用荧光【guāng】信号【hào】实时监测整个PCR进【jìn】程【chéng】，后通过标准曲【qǔ】线对未知模板进行定量分【fèn】析的方法【fǎ】。

实时荧【yíng】光定量PCR避免了传统PCR以终产物检测定量【liàng】产生的偏差，提高实验【yàn】的重复性。该技术已被广泛【fàn】用【yòng】于【yú】检测细胞mRNA表达量的【de】变【biàn】化【huà】；比较不同组【zǔ】织【zhī】的 mRNA表达差异；验证基【jī】因芯片，siRNA干扰【rǎo】的实验结果等。

SYBR Green荧光染料法

SYBR Green是【shì】一种DNA结合染料，能非特【tè】异地掺入到【dào】双链DNA中去。在【zài】游离状【zhuàng】态【tài】下，它【tā】不发出荧光，但一旦结【jié】合到双【shuāng】链【liàn】DNA中以后，便可以发出荧光。

它的大优点就是可【kě】以与【yǔ】任意引物、模板相配合，用于任意反【fǎn】应体系【xì】中【zhōng】。从【cóng】经济角度考虑，它也比其它的探针的价格要便宜【yí】得多。但【dàn】由于【yú】它【tā】能与所有的双链DNA结合，所以【yǐ】一旦反【fǎn】应体【tǐ】系中【zhōng】出现非特异【yì】扩【kuò】增，那它就【jiù】会【huì】影响到定量结果的可靠性与重复性。

要避免这种不利因素，可以通【tōng】过【guò】选择良【liáng】好的引物并【bìng】优【yōu】化反应条件以消除【chú】非特异性影响。

TaqMan荧光探针法

PCR扩增时【shí】在加【jiā】入一对【duì】引物的同【tóng】时加【jiā】入【rù】一个特异性的荧光探【tàn】针，该探针为一寡【guǎ】核苷酸，两端【duān】分别标记一个报【bào】告荧光基团和一个淬灭荧光【guāng】基团。

探针完【wán】整【zhěng】时，报告【gào】基团发射的【de】荧光信【xìn】号被淬灭基团吸【xī】收；PCR扩增时【shí】，Taq酶【méi】的9-24外切酶活性将探针酶切降解，使【shǐ】报告荧光基【jī】团和淬灭荧光基团分离，从而【ér】荧光监测系统可接收【shōu】到荧光信号。

即每【měi】扩【kuò】增一条DNA链，就有一个【gè】荧【yíng】光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物【wù】形【xíng】成*同步【bù】。