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细胞凝集反应
更新时间:2024-9-24   点击【jī】次数【shù】:1205次

我司技术人员总结出的细胞凝集反应原理和步骤:

实验原理

     细胞质膜【mó】是由蛋白质【zhì】不同程度镶嵌在脂双层中所【suǒ】形成的动态流动结构,蛋白质【zhì】和脂类分子又与寡糖【táng】链【liàn】结合为糖【táng】蛋白和【hé】糖【táng】脂分子,糖蛋白和糖脂分【fèn】子伸至细胞表面的【de】分【fèn】枝【zhī】状寡【guǎ】糖链在质【zhì】膜【mó】表面形成细胞外被(又称为糖萼)。许多研究结果表明:细胞间的分子识别【bié】、细胞的生【shēng】长【zhǎng】和【hé】分化、免疫【yì】反【fǎn】应和肿【zhǒng】瘤发生【shēng】等均与【yǔ】细胞【bāo】外被(分枝状寡糖链)有关。

      凝集素(lectin)是一类含【hán】糖的(少数凝集素例【lì】外【wài】)并能与糖进行专【zhuān】一性结合的蛋白质【zhì】,它具【jù】有凝集【jí】细胞和刺激细胞分裂【liè】的作用。凝集素促使细胞凝集主要【yào】是由于它能与【yǔ】细胞外【wài】被的【de】糖分【fèn】子相连接、在细胞间形成“桥”的结果,加入【rù】与凝【níng】集素互补【bǔ】的糖分【fèn】子【zǐ】可以抑制细胞间的【de】凝集【jí】反应。
实验试剂

1. PBS缓【huǎn】冲液:称取【qǔ】NaCl 7.2g、Na2HP04 1.48g、KH2P04 0.43g、加蒸馏水,定【dìng】容至l000 mL中,调pH值到7.2。
2. 1%肝素【sù】溶液:称取【qǔ】肝素钠0.1g,定【dìng】容至l0 mL生理盐水中即【jí】可。
实验设备

 显微镜、托盘天平、载玻片若【ruò】干、5mL注【zhù】射【shè】器、滴管【guǎn】2支、离心管2支。
实验材料

 1. 土豆块茎。
 2. 2% 红细胞悬液 
        以无菌方法抽取兔子【zǐ】耳缘静脉血液(5mL注射器用1%肝素溶液浸润)1mL,用生理盐水洗5次,每次【cì】3000 r/min,离【lí】心5 min,后按沉淀压积的红细胞【bāo】体【tǐ】积【jī】用【yòng】生理盐水配成2%红【hóng】细胞悬液。
实验步骤

1. 称取土豆去皮块茎2g,切成小块
2. 加【jiā】10 mL PBS缓冲【chōng】液,浸【jìn】泡2h(浸出的粗提液中含有可【kě】溶性土豆凝集素【sù】)
3. 载玻片上滴一滴土豆凝集素 
4. 再滴一滴2%红细胞液,充分混匀 
5. 静置20 min 
6. 低倍显微镜下观察血球凝集现象 
7. 以【yǐ】PBS液加2%血细胞悬【xuán】液作为对照实验,低倍显微【wēi】镜下【xià】观察【chá】。

希望细胞凝集反应原理和步骤对大家有所帮助。

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