我们在做【zuò】一项实验【yàn】的时候，需要了解的步【bù】骤【zhòu】与所需物品【pǐn】是*的。而【ér】今天，上海【hǎi】酶联这里要【yào】给朋【péng】友们分享的就是实验【yàn】制得细胞【bāo】的样【yàng】本，您【nín】需【xū】做好下【xià】文中的这【zhè】六步两注意。所谓的【de】六步两注意也就【jiù】是操作的六个步骤，和两条注意事项【xiàng】，下面我们就来详【xiáng】细的看看吧【ba】。

实验之前，我公司的技术人员为【wéi】朋【péng】友【yǒu】们特别准备说【shuō】明了【le】所需的物【wù】品有哪些：
1、培养基；不含酚红的DMEM培养基
2、处理玻片：将多聚赖氨酸溶液（溶【róng】于1mol/L pH7.0 Tris-HCl缓【huǎn】冲液中），涂【tú】布于玻片【piàn】上，干燥后即可使用。或者【zhě】APES 2ml溶于【yú】100ml丙酮中，将玻片【piàn】浸【jìn】泡入内，取出晾干【gàn】，180℃干燥【zào】备用。
3、洗涤液；0.1M，pH7.2～7.4PBS
4、细【xì】胞固定【dìng】液：4%多【duō】聚甲醛0.1MPBS(pH7.2～7.4)含有1/1000 DEPC。
5、乙醇：70%  90%  100%
6、胃蛋白【bái】酶溶液【yè】：用0.1N HCl将【jiāng】其稀释为【wéi】100μg/ml
7、设备：烤箱【xiāng】，CO2培养箱，倒置显微镜，玻璃载【zǎi】玻片，原位杂交盖玻片，温【wēn】箱，加【jiā】样器和吸头等【děng】。
操作步骤：
1、在37℃ 5% CO2条【tiáo】件下将细胞加【jiā】在【zài】处理的载玻片上，用培养基培养，时间【jiān】通过【guò】预实【shí】验确定；
2、细胞长【zhǎng】好后，用洗涤【dí】液【yè】洗2分钟×3次，室温下将其放入细胞【bāo】固定【dìng】液中固【gù】定30-60min，蒸馏水洗涤；
3、室温【wēn】下用洗涤液【yè】充分洗涤【dí】固定细胞，（干燥后-20℃冰冻保存【cún】2周以【yǐ】上）
4、杂交前将固定【dìng】的细胞进【jìn】行【háng】如【rú】下处理；依次【cì】在70%，90%，100%的乙醇中浸泡【pào】，脱水每次5min，用二甲苯洗涤【dí】，除去残【cán】留脂质依次在100%，90%，70%乙醇中浸泡，进【jìn】行再水化，每次5min，zui后【hòu】浸泡于洗涤液中；
5、在37℃用胃【wèi】蛋【dàn】白酶【méi】溶液10min处理固定【dìng】的细胞【bāo】，以增加细胞对大分子【zǐ】试剂的通透性，再用洗涤液洗5min；
6、用1%甲醛固定10min，用洗涤液洗净。
注意！
    1、所有溶液都必须用RNA酶抑制【zhì】剂【jì】处理。
    2、操【cāo】作中【zhōng】重要的是及时固定，并在固定【dìng】液中加【jiā】入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对【duì】mRNA的【de】分解作用。此外，过【guò】度固定对原位杂交有明【míng】显的不利【lì】影响。