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按照ELISA试剂盒说明书要求用途
更新【xīn】时间:2024-9-24   点【diǎn】击次数:1354次

 

ELISA试剂盒【hé】检测【cè】试【shì】剂每次试验、每【měi】块扳上【shàng】都要设置以下3项对照和用途:
1.空白对照【zhào】:仅用稀释液代替检测样【yàng】本、ELISA试剂【jì】盒用来观察zui终反应的显色“本底【dǐ】"、ELISA试【shì】剂盒并【bìng】用于酶标【biāo】仪【yí】消除、扣除【chú】“本底",也就【jiù】是说:以本底为“零"读取阳性、阴性对照孔和样本检测孔的【de】吸光【guāng】值(A);或【huò】者,在计算阴【yīn】性【xìng】对【duì】照均值(NCx)、阳性【xìng】对照均值(PCx)、样本读数的S/C.O.值时减去【qù】空【kōng】白对照的本底吸光值。早期的酶【méi】标仪没有自动扣除空白对照孔【kǒng】读数的功能,ELISA试剂盒这种【zhǒng】酶标仪现在已经【jīng】被淘汰了,写上这段话的目的【de】是【shì】补充【chōng】说明设【shè】置空白对【duì】照的用途【tú】。空白【bái】孔具体【tǐ】如何读【dú】取读数,应【yīng】该按照说【shuō】明书操作。
2.阴性对照:

     (1)阴性对照的含【hán】义【yì】与要求:ELISA试【shì】剂盒【hé】所谓阴性对照【zhào】,是本次检测试【shì】验中采用与【yǔ】待检【jiǎn】测物(样品、人用【yòng】试剂就是人的血清【qīng】等)具【jù】有【yǒu】同源性和同质性,又【yòu】不【bú】含有【yǒu】待检物质,并且能够客观【guān】比较和鉴别处理因素(血清免疫【yì】学试【shì】验中有特异性抗原与抗体【tǐ】反应【yīng】)之间的差异。因【yīn】此,用动物血清【qīng】或其【qí】制品代替阴性【xìng】人血清作为对照【zhào】品,无论【lùn】是从理论还是实践【jiàn】上都是不可取的。注意:据我所知,国产【chǎn】ELISA试剂盒【hé】中,有的厂家【jiā】是用【yòng】动物血清制品稀释配置或与部【bù】分人【rén】血清混合配置的;阴性对【duì】照读数,并不是“越低越好"。NCx值接近0.00X水平,这【zhè】是【shì】假象!试想一下,真正采【cǎi】用“阴【yīn】性人血清"的阴性对照品,NCx值会如此之低吗?例如,雅【yǎ】培【péi】乙肝六项ELISA试剂【jì】盒的NCx值【zhí】,分别【bié】为:0.010(HBsAg)、0.027(抗—HBs)、0.035(HBeAg)、1.083(抗—HBe)、1.065(抗—HBc)、0.045(抗HBc-IgM)。生物【wù】梅里【lǐ】埃的HIV试剂【jì】NCx是0.091。辨别试【shì】剂NCx值是【shì】否合理的【de】一个很简单的方法【fǎ】,只要对比大量阴性样本的【de】实际读【dú】数就“一【yī】目了然"啦!
(2)阴性对照分为两类

     一是【shì】受【shòu】检人血【xuè】清中并【bìng】不含有或【huò】方法学灵【líng】敏度未【wèi】能检【jiǎn】出的待检物的基准水【shuǐ】平,并且结果判断值【zhí】(Cut off)计算式中决定“是"(阳性【xìng】)、或【huò】“否【fǒu】"(阴性)的*可变值。阴性对照值高,导致假阴性;反之,ELISA试剂盒【hé】导【dǎo】致假阳性。二【èr】是阴性对【duì】照设【shè】置,在方法学上要求加入指示【shì】性定量标【biāo】准品【pǐn】,ELISA试剂盒如中和剂HBeAg,定量HBcAg等,用以【yǐ】检测抗—HBe、抗—HBc。或者,选取代表【biǎo】平均【jun1】水平的【de】正常人血清用作【zuò】阴【yīn】性对照,ELISA试剂盒如检【jiǎn】测抗—HBc IgM。此类【lèi】Cut off 值计算时,多【duō】数均【jun1】包括阴性和阳【yáng】性【xìng】对照值2个【gè】可变值。

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