包被【bèi】原的性质【zhì】很重要，蛋白浓度【dù】，是否【fǒu】降【jiàng】解，这【zhè】关系到【dào】你做出的抗体【tǐ】可不【bú】可以被其识别，所以保留抗原很【hěn】重【chóng】要，ELISA试剂【jì】盒做重组【zǔ】蛋白时【shí】一定要在冰浴【yù】下缓慢融化就是这个道理。让大量【liàng】不相【xiàng】关的蛋白【bái】质充填这些旷地空闲，从而【ér】排斥ELISA后的步骤中干扰物【wù】质的再吸附。但有时【shí】因为试【shì】验【yàn】的需要，包被原的【de】特殊性也可能采用中性的缓【huǎn】冲溶液来包【bāo】。

    常用封剂【jì】有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明胶【jiāo】；脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使用（5%－10％）；还有一些稀有用到的【de】各【gè】种动物血清（主【zhǔ】要为了排【pái】除【chú】相【xiàng】似蛋白干扰）和酪蛋白【bái】等等【děng】。详【xiáng】细的试【shì】验还要有坚固的理论【lùn】外也要【yào】实践，看一下可不可【kě】以应用到自己试验当中【zhōng】去。但选用什么，要依【yī】据【jù】试验【yàn】详细来【lái】实【shí】践。

应留意以下原理：

ELISA试【shì】剂盒因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物【wù】理吸附结合的，靠的是蛋【dàn】白【bái】质【zhì】分子结构上的【de】疏水基团与固相载体【tǐ】表面的疏水基团【tuán】间的作【zuò】用，这种物理吸附【fù】长【zhǎng】短特异【yì】性【xìng】的【de】，受【shòu】蛋白质的分子量、等电点【diǎn】、浓度等【děng】的影响，大分子【zǐ】蛋白质较【jiào】小分子蛋白【bái】质【zhì】通常含有【yǒu】更多的疏水基【jī】团，故更易吸附到固相载体表面。小分子【zǐ】必需依【yī】赖和大的蛋白载体【tǐ】偶联后才能固定【dìng】在【zài】固相载【zǎi】体上。还有有的包被原可能【néng】不【bú】是蛋白【bái】，对于生物素【sù】和【hé】脂类物质或【huò】小【xiǎo】分【fèn】子物质我们要事先对其改造再加以包被，亲【qīn】和素生物素:先亲和素先包【bāo】被载体，加入生物素化【huà】的DNA，这【zhè】种包被【bèi】方法【fǎ】平均、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定【dìng】量测定。常用【yòng】的包被液除【chú】了刚才提【tí】到【dào】的【de】pH9.6碳酸盐缓【huǎn】冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。

    我们在使用【yòng】ELISA试剂盒96孔板的实验测定的时候，常发现有【yǒu】“边【biān】缘效应"，也【yě】就【jiù】是【shì】外【wài】周孔显色较中【zhōng】心【xīn】孔深。经研究证实在【zài】温育【yù】中的【de】热力学梯度可能【néng】是根本【běn】原【yuán】因之所【suǒ】。聚苯乙烯【xī】本身【shēn】为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定【dìng】中【zhōng】，将板【bǎn】从【cóng】室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周【zhōu】孔与中心孔之间【jiān】可能【néng】存在一热力学梯度。因此使用【yòng】水浴或在将反应溶【róng】液【yè】加入至【zhì】板孔中时，将【jiāng】板和溶液均加热【rè】至【zhì】温育【yù】温度【dù】（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应"，并【bìng】且可提【tí】高测定的重复性【xìng】。 
    还有就是在实验【yàn】中，必然【rán】有使用微量加样【yàng】器加入样本的【de】步骤。提醒注意：加样不【bú】可【kě】太快，要避免加在孔壁上部，不可溅【jiàn】出和产生气【qì】泡。ELISA试剂盒太快的话无【wú】法保证微量加样的准确性和均【jun1】一性。加在孔【kǒng】壁上部的【de】非包被区【qū】，易导致非【fēi】特异吸附。溅【jiàn】出【chū】会【huì】对邻近孔产生污【wū】染。出现气泡【pào】则反应【yīng】液界【jiè】面【miàn】有【yǒu】差异。所【suǒ】以，有时候一份标本【běn】用相同的试剂盒这次【cì】测定为阳性，下次【cì】测定为【wéi】阴性，往【wǎng】往【wǎng】就是上述加样及试【shì】剂的错误所致【zhì】。