每个实验都有自己的规则以及注【zhù】意点,elisa实【shí】验也不例外【wài】,对于【yú】elisa实验如【rú】此条件严【yán】格的,那【nà】么如何【hé】才【cái】能【néng】保障elisa实验的正常进行【háng】呢,下面操作【zuò】人员【yuán】的技术要【yào】求,的确是如此,下面就是【shì】elisa实验时索要注【zhù】意的问题。
ELISA实验操作18条要点:
1、要保证移【yí】液枪的准确性,误差不能超过2%。可用水和【hé】电子天平【píng】进【jìn】行确定。但hao有专业人员进行【háng】矫正。
2、要配【pèi】备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一【yī】支。吸取不【bú】同的液体后,要【yào】更换枪头【tóu】。即使是吸取标准【zhǔn】品时。
3、要在实验前1小时将试剂【jì】盒【hé】从冰箱中【zhōng】取【qǔ】出,使各种试剂都【dōu】恢复到室温,以使【shǐ】结果更稳【wěn】定。
4、实验时,要使底物避光保存。
5、用枪【qiāng】吸取液体时速度不【bú】能太快,以【yǐ】免产生气泡而使吸取量不【bú】准确。
6、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
7、将液体加【jiā】到【dào】酶【méi】标孔中时,避免枪头和孔内【nèi】液体接触【chù】,可【kě】使【shǐ】枪头上的液滴和孔壁接触【chù】,液滴会自然流下去。
8、液体全部加完后,可将【jiāng】酶标板【bǎn】在桌子【zǐ】上平行【háng】轻【qīng】轻晃动30秒,混匀液体【tǐ】。也可以用酶标【biāo】仪的晃动【dòng】功【gōng】能。
9、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
10、洗板时【shí】,每次洗液加入【rù】后【hòu】,应静置1分钟,使清洗更加*。没有【yǒu】洗板【bǎn】机时,倒去液体后,要将酶【méi】标板【bǎn】在报纸或毛纸上用【yòng】力【lì】拍干。
11、洗【xǐ】液不够时,可【kě】用【yòng】蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲【chōng】液【yè】,加【jiā】入【rù】0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮【dàn】钠后可长期【qī】保存【cún】。
12、底物是光敏感的,要在临用前现配。
13、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。
14、底物有一定的毒【dú】性【xìng】,终止液对皮肤有腐【fǔ】蚀性,应尽量避免接【jiē】触。
15、待检样品要澄清,否则会影响结果。
16、温浴时间应遵守试剂盒规定。
17、应尽量做双孔实验,这样才能保证数据的准确性。
18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。