在ELISA试剂盒【hé】中，进行【háng】各项实验条件的【de】选择是【shì】很重【chóng】要的，其中【zhōng】包括；

    固相载体的【de】选择：许【xǔ】多物质可作为固相载体，如【rú】聚氯【lǜ】乙【yǐ】烯、聚苯乙烯【xī】、聚丙【bǐng】酰胺和纤维素等【děng】。其形式可以是【shì】凹孔平板、试【shì】管、珠粒等。目前常用的【de】是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载【zǎi】体，在使【shǐ】用前【qián】均可进行筛选：用等量抗【kàng】原包被，在同【tóng】一实验【yàn】条件下进【jìn】行反应【yīng】，观察其显色反【fǎn】应【yīng】是否均一性，据此【cǐ】判【pàn】明其吸附性能是否良好。
    包【bāo】被抗体【tǐ】（或抗原）的选择：将抗体【tǐ】（或抗原【yuán】）吸【xī】附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时【shí】一【yī】般要求PH在【zài】9.0～9.6之间。吸【xī】附温度，时间及其【qí】蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋【dàn】白质包被的zui适浓度需进【jìn】行【háng】滴【dī】定：即【jí】用不【bú】同的蛋白质浓度【dù】（0.1、1.0和10μg/ml等）进行【háng】包被【bèi】后【hòu】，在其它试验条件相同时，观察阳性【xìng】标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的【de】浓【nóng】度。对于多数蛋白质【zhì】来说通常【cháng】为1～10μg/ml。
    酶标记抗体工作浓度的选择【zé】：首先用直接ELISA法进行初【chū】步效【xiào】价的滴定（见酶标【biāo】记抗体【tǐ】部份【fèn】）。然后再固定其它条件或【huò】采取“方阵法【fǎ】"（包【bāo】被物、待检样品的参考【kǎo】品【pǐn】及酶标记【jì】抗体【tǐ】分【fèn】别【bié】为不同的稀释度）在【zài】正【zhèng】式【shì】实验系统里准确地滴定其工作浓度。
    酶的底物及供氢【qīng】体的选择【zé】：对供【gòng】氢体的【de】选择要【yào】求是价廉、安全、有明【míng】显地显色反应，而本身无【wú】色。有些供氢体（如OPD等）有潜【qián】在的致癌作用，应注意防护。有条【tiáo】件者应【yīng】使用【yòng】不致癌【ái】、灵敏度高【gāo】的供氢体，如TMB和ABTS是目【mù】前较【jiào】为【wéi】满意的供氢体。进【jìn】口ELISA试剂【jì】盒底物作用一段【duàn】时间后，应加入【rù】强酸或强碱以终止【zhǐ】反应。通常底【dǐ】物作用时【shí】间【jiān】，以9-24分钟【zhōng】为宜。底物使用液必须新鲜配制【zhì】，尤其【qí】是H2O2在临用前加入【rù】。